南方农业学报

作者：杨维超, 蓝达愉, 黄皓, 文俊丽, 李洪雷, 车江旅, 周生茂, 袁高庆,

关键词：生姜, 土传病原菌, 五重PCR检测体系, 病情监测,

【目的】建立一种能够同时快速检测青枯菌（Ralstonia solanacearum）、镰刀菌（Fusarium spp.）、果胶杆菌（Pectobacterium spp.）、肠杆菌（Enterobacter spp.）和腐霉菌（Pythium spp.）的五重PCR体系，为早期准确诊断生姜多种土传病害提供技术支撑。【方法】针对引起生姜青枯病和根茎腐烂病的5类土传病原菌，设计和筛选病原菌的特异性引物组合，探索引物最佳浓度、退火温度和灵敏度，建立最佳的五重PCR检测体系，并应用于田间植株样品的检测，以验证其实用性。【结果】根据青枯菌flic基因、肠杆菌rpoB基因和腐霉菌18S rDNA分别设计特异性引物对Rs1F/Rs1R、En1F/En1R和Py1F/Py1R，并结合已报道镰刀菌特异性引物Fu3/Fu4和果胶杆菌特异性引物23SPecF/23SPecR，建立5种生姜土传病害的多重PCR检测体系（25.00μL）：以上每条引物分别为1.20、0.20、0.60、1.60和0.15μL,2×PCR Mix12.50μL，不同病菌DNA模板各1.00μL,ddH2O补足至25.00μL，最适退火温度为55.4℃。建立的五重PCR检测体系可同时扩增出大小分别为516、370、266、207和159 bp的特异性片段，该检测体系对青枯菌、肠杆菌和腐霉菌的最低检测限为10-1 pg/μL，对镰刀菌和果胶杆菌的最低检测限为1 pg/μL，同时检测5类病原菌的灵敏度为103 pg/μL。本研究建立的五重PCR检测体系可对田间病株进行准确检测。【结论】建立的五重PCR检测体系能同时对青枯菌、镰刀菌、果胶杆菌、肠杆菌和腐霉菌进行准确检测，可应用于生姜多种土传病害的早期快速诊断和田间病情监测。

来源：2026年第2期

《南方农业学报》期刊编辑部

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