南方农业学报杂志

南方农业学报杂志2022年第8期

• 猪流行性腹泻病毒G2a变异株CH-HK-2021的分离鉴定及其遗传进化分析

  彭棋, 张雪, 赫文龙, 范宝超, 王丹丹, 刘茂军, 李彬,

  【目的】明确猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点，为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞（Vero）上进行PEDV分离，分别采用间接免疫荧光试验（IFA）、 Western blotting、 RT-PCR和电镜观察进行鉴定，通过TCID50测定病毒滴度及绘制病毒体外增殖动态曲线；将分离毒株基因组分成33段进行RT-PCR扩增，使用Lasergene中的SeqMan拼接序列，然后以MEGA 7.0进行遗传进化分析，并以Protean中的Jameson-Wolf算法进行抗原性分析。【结果】其中1份PEDV阳性仔猪肠道组织样品在Vero细胞上盲传至第6代时出现典型的细胞病变，将其命名为CH-HK-2021毒株； IFA和Western blotting鉴定结果表明CH-HK-2021毒株能与小鼠抗PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应，且RT-PCR能扩增获得预期的目的条带，证实分离毒株即为PEDV。CH-HK-2021毒株的直径在80~120 nm，且病毒粒子表面带有刺突样的形状，属于冠状病毒；其在Vero细胞上能稳定传代，目前已传至100代。CH-HK-2021毒株在感染Vero细胞24 h后，其病毒滴度达最高值，为105.6 TCID50/mL。CH-HK-2021毒株全基因组除去poly （A）尾结构为28034 bp，与PEDV参考株在全基因组水平上的核苷酸序列相似性为96.0%~98.9%，与参考毒株S基因核苷酸序列的相似性为93.1%~99.0%，其中与变异株CH/JX/01（KX058031）的核苷酸序列相似性最高，与经典毒株AVCT12（LC053455）的核苷酸序列相似性最低。CH-HK-2021毒株属于G2a变异株，为我国当前的流行毒株。G2a毒株与G2b变异株在S基因上存在42个核苷酸差异位点，在S蛋白上则存在6处抗原性差异位点，且主要的差异位点位于S2亚基上。【结论】分离获得的CH-HK-2021毒株属于PEDV G2a变异株，为我国当前的流行毒株，与PEDV经典毒株的亲缘关系相对较远。G2a毒株和G2b变异株在S2亚基上存在多处抗原性差异位点，故推测S2亚基是导致G2a毒株与G2b变异株抗原性差异的主要原因。

• 厚鳞柯叶水提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌机理

  罗泽萍, 潘立卫, 姚东梅,

  【目的】明确厚鳞柯叶水提物（Aqueous extract of Lithocarpus pachylepis leaf， AELL）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 （Methicillin-resistant Staphylococcus aureus， MRSA）的抑菌效果及其作用机理，为开发安全高效、低毒环保、无残留的抗MRSA药物提供理论依据。【方法】采用微量肉汤稀释法、平板菌落计数法分别测定AELL对MRSA的最小抑菌浓度 （MIC）和最小杀菌浓度 （MBC），以比浊法绘制AELL处理后MRSA的生长曲线，并通过酶标仪测定、流式细胞仪及扫描电镜等测定AELL处理后MRSA生物被膜清除作用、纤维蛋白原黏附率、呼吸代谢活力、可溶性蛋白含量、DNA含量、细胞周期分布、细胞凋亡率、胞内活性氧（ROS）水平及其形态结构特征的变化情况。【结果】 AELL可能通过影响MRSA对数生长期而发挥抑制或杀灭作用，其MIC和MBC均为0.15625 mg/mL。与空白对照组相比，经AELL处理后MRSA的生物被膜含量明显下降；随着AELL处理浓度的增加， MRSA相对黏附率呈逐渐下降趋势，从47.486%下降到5.440%。随着AELL处理时间的延长， MRSA的呼吸代谢活力逐渐降低，且呼吸链脱氢酶活性明显低于空白对照组，说明AELL可能是通过抑制MRSA呼吸链脱氢酶活性促使菌株处于死亡甚至呈破碎状态。经AELL处理后，MRSA可溶性蛋白呈明显下降趋势，还扰乱MRSA细胞周期分布，使其停滞在S期，同时抑制DNA合成； MRSA的细胞凋亡率和胞内ROS水平均随AELL浓度的增加而呈逐渐上升趋势； MRSA的形态结构不规则、萎缩、畸形，细胞塌陷，细胞间隙出现裂痕，细胞壁严重弯曲、变形。【结论】 AELL具有开发成抗MRSA兽药、植物杀菌剂的潜力，其抑菌机理是通过清除MRSA生物被膜，降低其对纤维蛋白原黏附力，抑制蛋白和DNA生成，阻碍呼吸代谢，延缓细胞繁殖周期及促进菌体内脂质过氧化等，从而导致菌体细胞凋亡。

• 非生物胁迫下植物体内活性氧和丙酮醛代谢的研究进展

  赵晶晶, 詹万龙, 周浓,

  活性氧（ROS）和丙酮醛（MG）是植物响应非生物胁迫过程中不可或缺的组成部分。低剂量的ROS或MG参与信号交流、种子萌发、植物生长发育及非生物胁迫应答等过程，而过量的ROS或MG具有高反应性和细胞毒性，会导致植物处于氧化胁迫或MG胁迫状态。为了维持植株体内ROS和MG的动态平衡，植物自身进化出了一系列的ROS和MG产生及清除机制。文章归纳总结了植物体内ROS和MG的合成代谢过程、分解代谢过程以及两者合成和分解代谢间的关系，阐明了不同非生物胁迫 （干旱、温度、盐、碱、盐碱和重金属胁迫）条件下植物体内ROS和MG代谢间的调节情况。提出今后应加强植物体内MG的信号作用、乙二醛酶系统响应非生物胁迫的机理以及乙二醛酶系统耐逆基因工程开发的深入研究，以期为非生物胁迫下植物体内ROS和MG代谢机制的深入研究提供借鉴。

• 纳米氧化锌对花生幼苗生长和光合性能的影响

  张垒, 李增强, 代海芳, 李丽杰, 田志翔, 刘润强, 张志勇,

  【目的】探究不同浓度的纳米氧化锌（ZnO NPs）对花生幼苗生长和光合性能的影响，为ZnO NPs在花生生产中的研究和应用提供理论和实践依据。【方法】采用水培法对花生品种豫花37的幼苗分别进行不同浓度（0、 0.01、0.05、 0.10和0.50 mmol/L）和不同时间 （5和10 d）的ZnO NPs处理，测定花生幼苗的形态指标、气体交换参数、叶绿素荧光参数、叶绿素相对含量和氮平衡指数等，并对以上指标进行统计分析。【结果】随着ZnO NPs处理浓度的增加和时间的延长，花生幼苗的鲜重、干重、总根长、总根表面积、净光合速率、气孔导度、光化学性能指数、氮平衡指数和叶绿素相对含量等指标均呈逐渐降低或波动降低趋势，蒸腾速率先升高后降低，类黄酮相对含量逐渐增加。处理10 d时，0.10和0.50 mmol/L ZnO NPs处理使幼苗的鲜重、根干重、净光合速率和光化学性能指数分别显著降低26.3%~41.7%、16.7%~41.7%、 50.9%~80.7%和46.7%~59.2% （PP<0.01，下同）正相关，幼苗鲜重还与光化学性能指数和氮平衡指数呈极显著正相关。【结论】 ZnONPs抑制了花生幼苗根系对水分和氮素的吸收，同时抑制幼苗叶片的叶绿素合成、损伤光系统Ⅱ结构，降低幼苗的净光合速率，使幼苗的水分和养分供应不足，从而抑制幼苗生长。

• 不同间作模式下糯高粱根际土壤特性及产量变化

  赵强, 章洁琼, 汪灿, 周棱波, 张国兵, 彭秋, 高杰, 彭方丽, 张春兰, 邵明波,

  【目的】研究不同间作模式对糯高粱根际土壤养分、酶活性、微生物群落及产量的影响，为筛选合理的糯高粱间作模式提供理论依据。【方法】以单作糯高粱 （SW）为对照，设糯高粱+花生 （WP）、糯高粱+大豆 （WS）、糯高粱+辣椒 （WC）和糯高粱+红薯 （WSP） 4种间作处理，于拔节期、开花期和成熟期测定糯高粱根际土壤养分、酶活性及微生物含量，并于成熟期测定糯高粱产量及构成因素。【结果】不同处理间，土壤有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、有效磷和速效钾含量均表现为WS>WP>WSP>WC>SW；糯高粱根际土壤过氧化氢酶、多酚氧化酶和脲酶活性从糯高粱拔节期到成熟期均表现为先增加后减少，且均在开花期达最大值，开花期WS、 WP、 WSP和WC处理下过氧化氢酶活性分别是SW处理的2.25、 1.54、 1.21和1.06倍，多酚氧化酶活性分别是SW处理的2.38、 1.60、 1.39和1.12倍，脲酶活性分别是SW处理的1.70、 1.67、 1.32和1.23倍；糯高粱根际土壤总磷脂脂肪酸 （PLFA）、细菌PLFA、真菌PLFA、放线菌PLFA、革兰氏阳性菌PLFA和革兰氏阴性菌PLFA含量均表现为WS>WP>WSP>WC>SW。与SW处理相比， WS、 WP、 WSP、 WC处理下糯高粱产量分别降低1.1%、 6.7%、 7.7%和9.0%，千粒重分别增加35.8%、 23.7%、 13.8%和7.3%，穗粒数分别增加54.8%、 51.4%、 41.2%和36.4%，穗长分别增加22.2%、 12.9%、 8.3%和5.5%。相关分析结果表明，穗长、穗粒数和千粒重与糯高粱根际土壤特性之间均存在极显著正相关 （P<0.01）。【结论】合理的间作模式可以改善糯高粱根际土壤微生物群落结构，增加土壤养分，优化糯高粱的穗结构。糯高粱+大豆可能成为糯高粱栽培的理想间作组合。

• 夜间增温下施硅对稻田CH4好氧氧化及其氮响应的影响

  周聪, 谢晴, 薛梦琪, 张耀鸿, 娄运生, 贾仲君, 高霄鹏,

  【目的】研究硅肥对增温稻田甲烷（CH4）好氧氧化速率的影响效应，为探索未来全球变暖背景下稻田温室气体减排措施提供科学依据。【方法】采用田间开放式增温系统对稻田土壤进行夜间增温，共设4个处理：夜间常温不施硅 （CK）、夜间增温不施硅 （NW）、夜间常温施硅 （Si）和夜间增温施硅 （NW+Si）。采集上述处理4年后的耕层根际土和非根际土，在无氮添加和氮添加（NH4+、 NO3-和尿素）条件下进行室内培养，采用13CH4标记方法，研究稻田CH4好氧氧化速率和固碳特征及其对氮肥的响应。【结果】 Si处理稻田土壤的总有机碳和水溶性有机碳含量分别为23.2 g/kg和216.7 mg/kg，较CK稻田提高10.5%和26.7%；而NW处理的总有机碳和水溶性有机碳则分别较CK稻田降低11.9%和9.9%。施硅处理 （Si和NW+Si）根际土的CH4好氧氧化速率显著高于不施硅处理 （CK和NW）（P4氧化驱动的13C有机碳 （ 13C-SOC）净增量为12.5~13.2 μmol/g，固碳效率达61%~66%，均高于不施硅处理 （CK和NW）。添加氮条件下4个处理的CH4氧化速率总体上大幅增加，其中以NW+Si处理的非根际土最明显。相反，氮添加对稻田的13C-SOC净增量无明显影响，从而降低了稻田土壤CH4氧化驱动的固碳效率。【结论】施硅可缓解夜间增温对稻田CH4氧化过程的抑制作用，同时也提高其固碳效率。

• 紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

  刘博, 蒲乐莹, 陶科, 金洪, 侯太平,

  【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株，并对其发酵条件进行优化，为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象，以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标，利用稀释涂布法分离细菌；利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株；利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性；通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位；利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌，从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株，其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强，且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示，其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%~77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果，将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示，其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、 1%酵母浸粉和0.5% NaCl；最适发酵条件为初始pH 6.5~7.0、培养温度35 ℃、 250 mL锥形瓶装液量80 mL、接种量3%、培养时间36 h、转速180 r/min。在优化后的发酵培养条件下，菌株LJ3-1对燕麦镰刀菌 （Fusarium avenaceum）的抑菌活性由76.5%提高至89.3%。【结论】菌株LJ3-1对紫花苜蓿根腐病5种病原菌均具有良好的拮抗作用，可作为研制苜蓿根腐病生物防治菌剂的候选菌株。

• 草果叶斑病类致病菌对新型低毒药剂的敏感性及交互抗性

  李纪潮, 张金渝, 蔡明姬, 陈秀花, 唐乙云, 杨绍兵,

  【目的】筛选高效防治草果叶斑类病害的绿色低毒药剂，为草果叶斑类病害的绿色防控和生态种植提供科学依据。【方法】以3种草果叶斑类病害 （炭疽病、叶瘟病和叶斑病）的强致病菌 ［炭疽菌 （Colletotrichum sp.）、灰梨孢菌（Pyricularia grisea）和茎点霉（Phoma sp.］为材料，采用菌丝生长速率法测定6种药剂（嘧霉胺、腈菌唑、咪鲜胺、代森锰锌、嘧菌酯和吡噻菌胺）对草果叶斑病类致病菌株的敏感性和毒力变异系数；通过药剂间交互抗性分析，筛选具有较好协同作用的药剂组合。【结果】吡噻菌胺和咪鲜胺对炭疽菌和灰梨孢菌的毒力最强，与其他药剂的半最大效应浓度 （EC50）差异显著 （P50平均值分别为0.04和0.08 μg/mL，吡噻菌胺对炭疽菌菌丝生长抑制率均在61.68%以上，最高达93.57%。6种药剂对茎点霉均具有较高毒力， EC50介于0.17~4.99 μg/mL，其中咪鲜胺和嘧菌酯的毒力最强。6种药剂对3种病原菌的毒力变异系数分析结果显示，吡噻菌胺和咪鲜胺2种药剂的毒力虽然较强但变异系数较大，对病菌存在较大的个体差异。各药剂对3种病菌的lgEC50相关性分析结果显示，吡噻菌胺、咪鲜胺和腈菌唑3种药剂间具有较高的交互抗性 （P<0.01）；而吡噻菌胺和咪鲜胺分别与嘧霉胺、代森锰锌、嘧菌酯之间交互抗性较小。【结论】吡噻菌胺和咪鲜胺单剂分别与嘧霉胺、代森锰锌、嘧菌酯的复配剂可作为草果叶斑病类病害的新型低毒防控药剂在草果生态种植中推广使用。

• 云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性研究

  赵永鑫, 陈玘喆, 杜广祖, 陈斌,

  【目的】探究云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性组成，为进一步开发、利用和保护思茅松林虫生真菌资源提供理论依据。【方法】 2019—2020年，采用踏查法对云南省澜沧县思茅松林内被虫生真菌感染的罹病虫体进行采集，采用划线法和弹射法对虫生真菌进行分离培养，结合形态学方法对虫生真菌进行种类鉴定。【结果】从物种组成看，云南省澜沧县思茅松林虫生真菌有5属9种，分别为白僵菌属球孢白僵菌和布氏白僵菌、绿僵菌属黄绿绿僵菌和金龟子绿僵菌、棒束孢属细脚棒束孢和环链棒束孢、虫草属高雄山虫草、线虫草属下垂虫草和蜂头虫草，其中球孢白僵菌和细脚棒束孢为优势种，相对多度分别为44.09%和33.33%。从物种多样性分析来看，澜沧县思茅松林下虫生真菌物种多样性丰富，分布均匀，垂直地带分布特征明显。从侵染寄主昆虫种类看，球孢白僵菌的寄主范围最广，共16种，其中鞘翅目昆虫占侵染个体总数的41.46%，叶甲被侵染的数量最多，占29.27%；细脚棒束孢和环链棒束孢的侵染寄主主要为松毛虫和鳞翅目蛹，其中细脚棒束孢的侵染寄主中鳞翅目蛹数量最多，占58.06%；白僵菌、棒束孢和高雄山虫草均可感染松毛虫，白僵菌和绿僵菌均可感染金龟子和膜翅目蚁科。【结论】云南澜沧县思茅松林虫生真菌物种多样性丰富，优势种为球孢白僵菌和细脚棒束孢，在松林害虫生物防治中具有良好潜力，应加强对球孢白僵菌和细脚棒束孢的保护和利用。

• 1株桉大毛虫病原真菌的分离鉴定及其寄主范围测定

  樊春丽, 罗来凤, 温文照, 韦文飞, 韦继光,

  【目的】明确1株从桉大毛虫上分离得到的虫生真菌的分类地位和生防潜力，为丰富虫生真菌资源及桉树林害虫的生物防治提供理论依据。【方法】采用常规组织分离法从自然感染死亡的桉大毛虫上分离病原菌，经致病性鉴定后，通过菌株形态学特征观察及rDNA-ITS、 EF1-α、 β-tublin基因序列联合构建系统发育进化树确定病原菌的分类地位；以不同环境条件下菌丝生长与产孢量为指标测定病原菌的生物学特性；用病原菌孢子液喷洒供试虫体测定其寄主范围；将病原菌孢子配制成不同浓度梯度的孢子悬浮液处理东亚飞蝗、红火蚁和马尾松毛虫进行毒力测定；使用病原菌生产的菌粉进行大田防治试验，调查防治效果。【结果】从罹病桉大毛虫上分离到1株虫生真菌菌株DMC01，经致病性鉴定确定其为桉大毛虫致死病原菌；经形态学特性分析和分子鉴定确定菌株DMC01为爪哇棒束孢（Isariajavanica），全光照 （24 L∶0 D）、温度26 ℃、 pH 7、碳源为蔗糖、氮源为牛肉膏和酵母浸粉条件下最有利于其菌丝生长和产孢；菌株DMC01寄主范围初步测定其可寄生5目15种害虫，在1&#215;108孢子/mL处理6~10 d后， 4龄东亚飞蝗、红火蚁和4龄马尾松毛虫的校正死亡率均达100.00%。2020年菌株DMC01菌粉对桉树林所有害虫的平均防效为51.9%，2021年平均防效达79.1%。【结论】从自然感染死亡的桉大毛虫上分离获得1株爪哇棒束孢菌株DMC01，该菌株对桉树林害虫具有高致病力，具有作为生防菌剂的潜力。

• 可可毛色二孢拮抗菌的鉴定及发酵条件优化

  刘双龙, 杨德洁, 牛晓庆, 杨福孙, 覃伟权,

  【目的】筛选对可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）具有拮抗作用的生防菌株，为由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的生物防治提供菌种资源及指导。【方法】以海南发病槟榔园健康槟榔根组织及根际土壤为试验材料，采用组织匀浆法和平板稀释梯度培养法分别分离槟榔根内生细菌及根际土壤中的细菌，应用平板对峙法筛选出对可可毛色二孢菌具有拮抗作用的菌株；通过平板对峙法测定拮抗菌株菌液对3种槟榔根部病害病原真菌尖孢镰刀菌 （Fusarium oxysporum）、奇异根串珠霉菌 （Thielaviopsis paradoxa）和可可毛色二孢菌的抑制作用；通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对拮抗菌株进行鉴定；采用盆栽试验初步验证拮抗菌株对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的防治效果；采用单因素变化试验等筛选拮抗菌株的最佳发酵条件。【结果】经平板对峙法筛选出5株拮抗作用较强的菌株，其中菌株wrj-2-5的抑菌率最高，为74.07%；菌株wrj-2-5菌液对可可毛色二孢菌、尖刀镰刀菌和奇异根串珠霉菌菌丝生长均有较强的抑制作用，抑制率均在70.00%以上。综合菌株形态学观察、生理生化测定和16S rDNA分析结果，将菌株wrj-2-5鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。室内盆栽试验结果表明，菌株wrj-2-5对可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病具有较好的防病作用，对照组发病率为60.00%，试验组长势正常未发病。拮抗菌wrj-2-5最佳培养基配方为酵母浸粉1.5 g、葡萄糖1.5 g、 MgSO4&#183;7H2O 0.2 g、水100 mL；最佳发酵条件为转速240 r/min、培养温度28 ℃、培养时间36 h、初始培养基pH 6、初始接种量8%。【结论】菌株wrj-2-5为铜绿假单胞菌，其对可可毛色二孢菌、尖孢镰刀菌和奇异根串珠霉菌均有较好的抑制作用，对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病有较好的防治效果，可作为研制槟榔根腐病生防菌剂的候选菌株资源。

• 5个生姜品种对淹水胁迫的生理响应及耐涝性评价

  李港, 彭慧敏, 蔡小东, 马佳伟, 马慧慧, 尹军良, 尚淼, 张中华, 朱永兴, 刘奕清,

  【目的】探究淹水胁迫对生姜苗期形态变化及生理指标的影响，筛选耐涝种质资源，为生姜耐涝机理研究及抗涝品种选育提供参考。【方法】以生姜主产区的5个主栽品种山东大姜、罗平小黄姜、竹根姜、贵州小黄姜、凤头姜为试验材料，设置正常水分处理（CK）和淹水处理（TR），测定不同处理条件下的生长指标、生理指标及叶绿素荧光参数，利用隶属函数法对5个品种苗期的耐涝性进行综合评价。【结果】与CK相比，淹水胁迫下各生姜品种的株高、茎粗和根系活力均下降；生姜叶片的MDA和H2O2含量均显著上升（PFv/Fm）和光化学淬灭系数（qP）显著降低，非光化学淬灭系数（NPQ）显著升高。综合评价结果表明， 5个品种生姜的耐涝性排序依次为山东大姜>贵州小黄姜>罗平小黄姜>凤头姜>竹根姜。相关分析结果显示，株高与综合评价值 （D值）呈极显著正相关（PD值呈显著正相关，叶片MDA含量与D值呈极显著负相关。【结论】生姜通过维持较高的根系活力，提高自身抗氧化能力来抵御氧化损伤。5个品种中山东大姜耐涝性最强，竹根姜耐涝性最差。株高、茎粗和叶片MDA含量可作为生姜耐涝品种筛选的主要参考指标。

• 异质生境下大旗瓣凤仙花种群特征与生长状况

  关世凯, 陶大燕, 周锦业, 闫海霞, 宋倩, 罗述名,

  【目的】了解大旗瓣凤仙花野生种群生长状况和花部特征，以及异质生境对其种群特征和生长的影响，为大旗瓣凤仙花野生资源生长状况评价及保护提供理论参考。【方法】在桂林市阳朔县选择18个大旗瓣凤仙花野生种群作为调查对象，详细调查记录其种群规模、生境基本参数，株高、冠幅、分枝数等植株性状，以及花色、花大小、花量等开花性状，共14个量化指标，结合种群土壤养分含量及不同种群的生境类型和干扰情况，分析异质生境下大旗瓣凤仙花种群生长状况。【结果】 18个大旗瓣凤仙花种群规模表现出很大差异，种群数量为20~10000株以上、面积3~10000 m2以上，生境中郁闭度和土层深度也各不相同；不同种群植株高度、冠幅和分枝数差异明显，最大值分别为最小值的3.23、3.13和7.50倍；就开花特征而言，花量差异可达10倍以上，花朵长、花朵宽 （旗瓣宽）、花纵深和翼瓣宽等均在少数种群间表现出显著差异，最大值比最小值分别高出43.67%、 27.73%、 26.62%和25.96%；不同种群土壤养分含量差异较大，主要归因于人类活动。聚类分析显示18个种群中11个综合生长状况良好，以种群11最佳， 7个种群生长状况较差，以种群17最差，较好、较差种群在生境类型的优劣上体现出对应关系。人为干扰对于大旗瓣凤仙花种群生长具有影响，但未发现明显规律性。【结论】异质生境下大旗瓣凤仙花不同种群间株高、冠幅、分枝数和开花数量差异较大，上述4个指标是影响种群延续性的重要参数；大旗瓣凤仙花对土壤要求不高，土壤不是影响大旗瓣凤仙花种群生长差异的首要因素；种群11整体表现最好，可作为优异种质资源进一步开发利用。

• 黑果枸杞根系构型对干旱胁迫的响应机制

  张金菊, 郭有燕, 田青, 包新光, 张惠云,

  【目的】探讨黑果枸杞幼苗根系构型对干旱胁迫的响应机制，为黑果枸杞的种植、种群恢复和合理利用及其他旱生植物研究提供理论依据。【方法】以盆栽黑果枸杞幼苗为研究对象，采用控水法，设置正常供水（20.97%）（对照， CK）、轻度胁迫 （15.51%）、中度胁迫 （3.42%）、重度胁迫 （2.35%）和极重度胁迫 （1.45%）5个胁迫梯度，通过对比不同胁迫梯度对黑果枸杞幼苗根系拓扑指数、拓扑结构、生物量及相关根系形态指标的影响，分析黑果枸杞幼苗根系构型对干旱胁迫的响应。【结果】干旱胁迫下，黑果枸杞根系构型趋向于叉状分支模型。随干旱胁迫程度的增加，黑果枸杞幼苗根系由叉状分支向鱼尾形分支过渡；幼苗地上生物量、地下生物量和总生物量均呈现先增加后减少的趋势，且地上生物量和总生物量在不同处理间差异显著 （P0.5~1.0 mm>1.0~1.5 mm>1.5~2.0 mm>2.0~2.5mm。【结论】黑果枸杞的生长受干旱胁迫的影响，其根系不同形态指标及根系构型存在差异。轻度干旱胁迫有利于黑果枸杞幼苗根系正常生长，但黑果枸杞的耐受程度存在阈值，土壤含水量为15.51%时生长最佳。

• 广西16份桑资源叶的药用及营养品质综合评价

  邱长玉, 刘丹, 韦伟, 陆晓媚, 曾燕蓉, 朱光书, 张朝华, 黄胜, 朱方容, 林强,

  【目的】对16份桑资源叶的药用及营养品质进行综合评价，明确不同桑树品种的药用及营养成分，为桑树多元化开发提供理论依据。【方法】以保存于广西蚕业技术推广站桑树资源圃的16份桑资源叶为研究对象，测定桑叶多酚、脱氧野尻霉素 （DNJ） 、多糖、蛋白质、脂肪、维他命C （VC）含量等9项指标。运用主成分分析法、相关分析及隶属函数法进行综合评价。【结果】 16份桑资源叶的9个测定成分存在明显差异。其中，品种间DNJ含量差异最大，变异系数为41%，平均值为1803.17 μg/g，桂诱94-936的DNJ含量最高，为3239.25 μg/g，桂诱94-168的DNJ含量最低，为747.73μg/g；而品种间水分含量差异最小，变异系数仅6%，平均值为83.93%，桂诱94-936的水分含量最高，为91.46%， A17的水分含量最低，为71.02%。相关分析表明，多酚含量与单宁含量显著相关 （P<0.05）。相关分析和主成分分析表明影响桑叶综合品质的主要指标为酚类物质、生物碱、多糖和蛋白质等。通过对隶属函数值及权重进行计算得到16份桑资源叶的综合得分， 16份桑资源叶药用品质综合评价前3名依次为桂诱94-936、试11和桂诱8012，营养品质综合评价前3名依次为桂诱94-936、桂诱92L-26和湖107。【结论】综合桑叶营养品质和保健品质评价结果，桂诱94-936可作为药食同源品种的候选。多酚、 DNJ和多糖可作为桑树药用品质的评价指标，蛋白质、脂肪和VC含量可作为桑树营养品质的评价指标。

• 不同品种嘉宝果叶提取物的酚类成分及生物活性分析

  吴妙鸿, 邱珊莲, 林宝妹, 李海明, 张帅,

  【目的】研究3个品种嘉宝果叶提取物的酚类成分和生物活性，为嘉宝果叶的开发利用提供参考依据。【方法】测定大红钻、保利斯塔和乔尼尔3个嘉宝果品种的叶片提取物总酚和黄酮含量，利用超高效液相色谱—串联质谱法 （UPLC-MS/MS）分析提取物的酚类成分，并测定提取物的抗氧化活性 ［1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基 （DPPH&#183;）、2,2'-联氮-双 （3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基 （ABTS+）、超氧阴离子自由基 （O2-&#183;）清除能力及总抗氧化能力］和降糖活性 （α-葡萄糖苷酶抑制活性、 α-淀粉酶抑制活性），对总酚含量与生物活性的相关性进行分析。【结果】 3个品种嘉宝果叶提取物的总酚和黄酮含量分别为458.78~535.51 mg GAE/g和99.46~233.42 mg RE/g，总酚含量以乔尼尔最高，黄酮则以大红钻最高。大红钻和保利斯塔叶片的酚类成分以没食子酸、鞣花酸、儿茶素和表儿茶素含量较高，乔尼尔则以没食子酸、鞣花酸和槲皮素-3-O-葡萄糖苷含量较高。乔尼尔叶提取物的DPPH&#183;和ABTS+清除能力最强，半数清除浓度（IC50）分别为8.48和77.02 μg/mL，其总抗氧化能力也最强，为0.922 mmol/g； O2-&#183;清除能力、 α-葡萄糖苷酶抑制活性和α-淀粉酶抑制活性则以保利斯塔最强， IC50分别为0.893 mg/mL、 14.96 μg/mL和57.42 μg/mL。相关分析结果显示，总酚含量与DPPH&#183;、 ABTS+和O2-&#183;清除能力均呈极显著正相关（PPP>0.05）。【结论】 3个品种嘉宝果叶提取物的酚类含量和成分存在差异，乔尼尔的综合抗氧化能力最强，降糖活性则以保利斯塔最强，但均是开发抗氧化和降血糖健康产品的良好来源。

• 改性桔皮膳食纤维吸附茶多酚的条件优化及其体外模拟消化稳定性研究

  高慧颖, 赖恭梯, 官雪芳, 郑亚凤, 李舒婷, 王琦,

  【目的】开展改性桔皮膳食纤维对茶多酚的吸附条件优化及其复合物在模拟消化环境的稳定性研究，为促进茶多酚在健康食品中的应用提供技术支撑。【方法】采用动态高压微射流技术 （DHPM）改性的桔皮膳食纤维对茶多酚进行吸附，研究温度、时间、茶多酚浓度和pH对吸附量的影响，采用响应面法优化吸附条件，并建立模拟胃肠消化模型，考察膳食纤维—茶多酚复合物的消化稳定性。【结果】改性桔皮膳食纤维对茶多酚吸附量与温度呈负相关；随着时间的延长，茶多酚吸附量经历快速提高阶段后趋于平衡， 60 min时吸附量基本达到平衡；茶多酚浓度增至3.0 mg/mL时，其吸附量趋于饱和；溶液pH为7.0时，茶多酚吸附量达最大值。响应面试验结果表明，各因素对茶多酚吸附量的影响程度排序为温度>时间>茶多酚浓度>pH，且温度与时间、温度与茶多酚浓度的交互作用对茶多酚吸附量有显著影响（P<0.05，下同）。改性桔皮膳食纤维吸附茶多酚条件优化为：温度5 ℃，时间61 min，茶多酚浓度3.9 mg/mL， pH 7.0，在此条件下，茶多酚吸附量为54.26 mg/g，与模型理论值（54.46 mg/g）接近。体外模拟消化试验结果显示，改性桔皮膳食纤维—茶多酚复合物经模拟胃和肠道消化环境后，茶多酚保留率分别达92.07%和69.73%，显著高于纯茶多酚的保留率 （84.17%和47.29%）。【结论】改性桔皮膳食纤维可作为茶多酚的天然保护载体，通过吸附结合形成复合物，显著提高茶多酚在胃肠消化环境中的稳定性。

• 外源油菜素内酯对美乐葡萄光合特性和果实品质的影响

  乔子纯, 贺琰, 代红军, 梁新华,

  【目的】探究2,4-表油菜素内酯 （EBR）对葡萄光合特性和果实品质的影响，为提高葡萄光合效率和改善果实品质，以及油菜素内酯类化合物在酿酒葡萄上的应用提供理论依据。【方法】以酿酒葡萄美乐为试材，喷施不同浓度（0.2、 0.4和0.6 mg/L） EBR，以喷施清水为对照，研究EBR对葡萄光合特性和果实品质的影响。【结果】各EBR处理在葡萄的果实膨大期、转色期和成熟期均可提高蒸腾速率和气孔导度，其中0.4 mg/L EBR提高效果较好，在果实膨大期蒸腾速率和气孔导度的平均值分别较对照提高69.59%和20.87%； 0.2和0.4 mg/L EBR均可提高净光合速率，在果实膨大期，二者的净光合速率平均值较对照分别提高24.05%和18.38%，而0.6 mg/L EBR降低3.56%；在花后40 d， 0.2和0.4 mg/L EBR处理均显著提高RuBP羧化/加氧酶 （Rubisco）活性 （PP<0.01）；在成熟期， 0.2 mg/L EBR处理对促进可溶性总糖和还原糖的积累效果较好，含量分别达203.32和170.37 mg/g，各处理均可显著降低可滴定酸、单宁和总酚含量，其中0.4 mg/L EBR处理对单宁和总酚的降低效果较好，含量分别达7.59和5.26 mg/g，各EBR处理可促使果实提前完成转色。【结论】 0.6 mg/L EBR在处理前期会通过降低Rubisco活性和光合色素含量影响净光合速率， 0.4 mg/L EBR通过提高净光合速率、 Rubisco活性和光合色素提高植株光合作用，从而提高美乐葡萄果实品质。

• 响应面法优化地参三萜酸提取工艺及抗氧化活性分析

  李金金, 孟琦, 崔馨燕, 石汝杰, 吴应梅, 杨玲, 周浓,

  【目的】优化提取地参三萜酸工艺，分析其抗氧化活性，为地参生物活性成分的进一步研究及功能性产品开发提供参考依据。【方法】采用醇提法提取地参三萜酸，以乙醇体积分数、料液比、提取温度和提取时间为影响因素，三萜酸提取量为评价指标，通过单因素试验和响应面优化试验，对地参三萜酸提取工艺进行优化，并测定其对2,2-联苯基-1-苦基肼基自由基（DPPH&#183;）、 2,2-联氮-双3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二铵盐自由基（ABTS+）和羟自由基（&#183;OH）的清除率，以抗坏血酸（Vc）作阳性对照。【结果】 4个因素对地参三萜酸提取效果的影响排序为：乙醇体积分数>料液比>提取温度>提取时间，其中乙醇体积分数有极显著影响（PPP>0.05）；地参三萜酸最佳提取条件为：提取时间2.0 h、乙醇体积分数为95%、料液比1∶40、提取温度50 ℃，在此条件下，地参三萜酸提取量为1.9431 mg/g，与理论值（1.9440 mg/g）差异小。抗氧化活性结果表明，地参三萜酸对DPPH&#183;、 ABTS+和&#183;OH的最大清除率分别为87.46%、97.57%和46.78%，虽然均较Vc清除率低，但仍具有抗氧化活性。【结论】响应面优化法提取地参三萜酸方法可靠，地参三萜酸具有一定的抗氧化活性，可开发功能性产品。

• 桂产肿节风无机元素分析

  黄少军, 马留辉, 孟嗣杰, 唐志臣, 黄勇,

  【目的】分析桂产肿节风药材的23种无机元素含量，评价其安全性，为桂产肿节风药材的应用及质量评价提供参考依据。【方法】以采自广西不同产地的11批次肿节风药材为试验材料，微波消煮后，采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）和电感耦合等离子体发射光谱法（ICP）测定其Ti、 As、 B、 Ca、 Na等23种元素含量，再进行相关分析、主成分分析和重金属污染的综合评价。【结果】肿节风药材中含有丰富的无机元素，其中K（10888 mg/kg）、 Ca（5319 mg/kg）、 Fe（349.2 mg/kg）、 Na（115.6 mg/kg）和Zn（107.5 mg/kg）的平均含量远高于其他元素， As（0.1348 mg/kg）、 Mo（0.1048 mg/kg）和Sb （0.0477 mg/kg）含量较低； 23种无机元素之间有一定的相关性，其中有13个呈极显著正相关 （PP<0.05，下同）、 1个呈极显著负相关、 9个呈显著负相关；主成分分析表明As、 B、 Fe、Sr、 Sn、 Hg和Mn是肿节风的特征无机元素；重金属污染评价结果表明，肿节风药材中Pb、 Hg和Cd含量超标，超标率分别为72.73%、 45.45%和18.18%，所有样品综合污染指数均超安全级别，其中36.36%处于警戒级别， 63.64%处于轻度污染水平。【结论】初步明确肿节风的无机元素组成，筛选出7种特征无机元素，并绘制出无机元素图谱，该结果可为肿节风药材质量控制和安全性评价提供参考。

• 关岭牛FABP3和FABP4基因的分子特征及其组织表达分析

  石鹏飞, 阮涌, 刘文娇, 许家利, 孙金魁, 熊讯, 许厚强,

  【目的】探究关岭牛心脏型脂肪酸结合蛋白 （FABP3）和脂肪型脂肪酸结合蛋白 （FABP4）基因的分子特征及其在不同年龄段和不同组织中的表达差异，为揭示牛FABP3和FABP4基因对脂肪酸的调控作用机制提供理论依据。【方法】通过RT-PCR扩增关岭牛FABP3和FABP4基因蛋白编码区（CDS）序列，采用ProtScale、 ProtParam、 SOPMA、SWISS-MODEL、 TMHMM-2.0、 SignalP-5.0及NetPhos-3.1等在线软件进行生物信息学分析，同时以实时荧光定量PCR检测FABP3和FABP4基因在3日龄关岭犊牛、 24月龄关岭牛 （成年）及24月龄杂交牛 （关岭牛&#215;利木赞牛）各组织中的表达情况。【结果】关岭牛FABP3、 FABP4基因CDS序列全长分别为402和399 bp，对应编码133和132个氨基酸残基，其蛋白二、三级结构以无规则卷曲和延伸链为主，均无跨膜结构域和信号肽，且为稳定的亲水性蛋白。关岭牛FABP3、FABP4氨基酸序列分别存在26和21个磷酸化位点，其中又以苏氨酸磷酸化位点为主；关岭牛FABP3和FABP4蛋白与FABP1、 FABP6、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、脂蛋白脂肪酶（LPL）及激素敏感脂肪酶（LIPE）等存在互作关系。基于FABP3和FABP4氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示，关岭牛与牦牛的亲缘关系最近，其次是绵羊，与鸡和斑马鱼的亲缘关系较远。FABP3和FABP4基因在关岭牛和杂交牛各组织中均有不同程度的表达，其中， FABP3基因以在心脏中的相对表达量最高，且在成年牛中的相对表达量极显著高于犊牛和杂交牛（PFABP4基因以在脂肪中的相对表达最高，且在犊牛中的相对表达量极显著高于成年牛。【结论】关岭牛FABP3和FABP4基因具有较高的遗传保守性，且以在心脏和脂肪中的表达水平较高，与脂肪酸代谢密切相关。

• 吉富罗非鱼组蛋白酶B基因克隆及无乳链球菌感染后的表达分析

  朱佳杰, 敖秋桅, 谭芸, 罗永巨, 蒋和生,

  【目的】探究组蛋白酶B基因（CtsB）在吉富罗非鱼感染无乳链球菌前后的表达差异，为深入研究罗非鱼抗无乳链球菌感染的免疫应答机制及后续通过SNP分子标记/基因组编辑技术快速获得吉富罗非鱼抗病新品种提供科学依据。【方法】通过RACE克隆罗非鱼CtsB基因cDNA全长序列，使用SMART、 Splign、 MEGA v6.0、 BoxShade及MegAlign等在线软件进行生物信息学及系统进化分析，并以实时荧光定量PCR检测吉富罗非鱼CtsB基因组织表达谱及无乳链球菌感染后CtsB基因的表达变化规律。【结果】吉富罗非鱼CtsB基因cDNA序列全长1746 bp，包括161 bp的5'端非编码区（5'-UTR）、 592 bp的3'端非编码区（3'-UTR）及993 bp的开放阅读框（ORF），共编码331个氨基酸残基。基于CtsB氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示，吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼的亲缘关系最近，而与鲤鱼、大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎等物种相距较远。CtsB基因在吉富罗非鱼的肝脏、脾脏、鳃、前肾、脑、肠道、皮肤和肌肉等组织中均有表达，且以鳃组织中的相对表达量最高，是其他器官组织的2.0~3.0倍。吉富罗非鱼抗病家系和易感家系感染无乳链球菌后， CtsB基因在脾脏和肾脏中的相对表达量均显著上调 （PCtsB基因在鱼类的进化过程中具有高度保守性，但在不同物种中的表达模式存在明显差异。CtsB基因是吉富罗非鱼的重要免疫因子，在抵御无乳链球菌入侵过程中发挥着重要的免疫作用，可作为罗非鱼抗病育种的SNP分子标记给予开发利用。

• 盐度对不同蜕皮时期罗氏沼虾生理生化及蜕皮相关基因表达的影响

  黎兰诗, 戴习林,

  【目的】分析盐度对不同蜕皮时期罗氏沼虾蜕皮生理生化指标、能量代谢酶活性及蜕皮相关基因表达的影响，为实际生产中罗氏沼虾培育提供理论参考。【方法】以300尾平均初始湿体质量4.28&#177;0.53 g/尾的健康罗氏沼虾为对象，试验设0.2‰（对照）、 3.0‰、 6.0‰、 9.0‰、 12.0‰等5个盐度梯度，记录不同盐度条件下罗氏沼虾的蜕皮周期、每日蜕皮率和蜕皮增重率。按照不同蜕皮时期取肝胰腺、肌肉和鳃丝，使用生化试剂盒测定丙酮酸激酶 （PK）和琥珀酸脱氢酶（SDH）活力，并用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测蜕皮抑制激素（MIH）、维甲酸X受体（RXR）、蜕皮激素受体（EcR）、保幼激素酯酶环氧水解酶（JHEH）基因的表达情况。【结果】罗氏沼虾的蜕皮周期随盐度的升高而不断延长，其中6.0‰盐度组蜕皮周期最长，显著高于0.2‰盐度组 （PMIH基因在各盐度组的相对表达量均随蜕壳时间的延长而明显下降，在0.2‰和3.0‰盐度组蜕皮后期A与蜕皮后期B的相对表达量显著高于蜕皮间期C。RXR基因在蜕皮间期C的相对表达量最高，其他蜕皮时期均极显著低于0.2‰盐度组（PJHEH基因均在蜕皮前期D的相对表达量最高，而在3.0‰、6.0‰和12.0‰盐度组时，鳃丝EcR基因的相对表达量在蜕皮前期D极显著高于蜕皮间期C （PMIH基因上调表达、 EcR基因下调表达会引发蜕皮前期D时间延迟，蜕皮困难，致使JHEH和RXR基因表达下调，是导致罗氏沼虾生长缓慢的主要原因。罗氏沼虾养殖适宜的水体盐度为0.2‰~3.0‰。

• 5个品种白羽肉鸡大肠杆菌耐药差异分析

  周倩, 唐梦君, 张小燕, 陆俊贤, 唐修君, 高玉时,

  【目的】通过开展5个品种白羽肉鸡养殖过程中大肠杆菌流行病学研究及耐药性差异情况调查，了解不同品种肉鸡大肠杆菌耐药现状及其差异，为科学指导肉鸡相关疾病诊治和兽药监管提供参考依据。【方法】选用5个品种白羽肉鸡（2个为江苏养殖量较大的国外引进品种， 3个为我国自主选育配套系）为研究对象，分别采集0日龄胎粪样品及4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36和40日龄的泄殖腔棉拭子，经麦康凯培养基分离大肠杆菌后进行PCR鉴定，并采用Kirby-Bauer （K-B）法进行药敏试验。【结果】从1075份样品中共分离获得978株大肠杆菌，总分离率为91.0%。其中，广明2号（A品种）和圣泽901（C品种）的大肠杆菌分离率最高，均为93.0%； WOD168（E品种）的分离率最低，为88.4%。5个品种白羽肉鸡的胎粪样品分离率、 2个重复的分离率、 5个品种白羽肉鸡大肠杆菌总分离率及不同日龄的分离率均无显著差异 （P>0.05）。5个品种白羽肉鸡大肠杆菌对氨苄西林 （AMP）、阿莫西林 （AML）、红霉素 （E）、四环素 （TE）和氯霉素 （C）已产生较强的耐药性，对阿米卡星 （AK）、磷霉素 （FOS）、阿奇霉素 （AZM）和头孢曲松 （CRO）仍然较敏感；5个品种白羽肉鸡大肠杆菌分离株产生明显的多重耐药，但不同品种的优势耐药谱有所差异。【结论】不同品种白羽肉鸡大肠杆菌耐药情况受用药习惯、饲养方式及条件状况等环境因素的多重影响，但其多重耐药性具有一定的遗传稳定性。因此，在实际生产中应从动物饲养的源头抓起，鼓励和发展集约化养殖，加强饲料安全检测，改善饲养和防疫条件，严格进行合理规范用药，减少同一药物的使用频率，降低细菌耐药性，有效保障动物产品安全及维护人类健康。

• 黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析

  何坤, 吴华东, 张士林, 刘铮铮, 阮记明, 孙艺文, 李福贵,

  【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用，为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列，运用ProtParam、 SOMPA、 SWISS-MODEL、 SignalP、 TMHMM及NetPhos等在线软件进行nanos3蛋白生物信息学分析；采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况，并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp，包括147 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、 531 bp的开放阅读框 （ORF）及611 bp的3'非编码区（3'-UTR），共编码176个氨基酸残基。黄鳝nanos3蛋白分子量为19.61 kD，理论等电点（pI）为9.07，为碱性蛋白；在黄鳝nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序 “CCHC”结构域，无信号肽和跨膜结构域；蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高 （64.20%），其次是α-螺旋 （占24.43%），延伸链、 β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、 57.2%和50.3%，与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%，与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达，在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低，在卵巢中的相对表达量最高，极显著高于在其他组织中的相对表达量（Pnanos3基因仅在生殖细胞中表达，支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守，主要在卵巢的生殖细胞中表达，且以细胞质中的表达为主，与核遗传信息的传递相关，是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。

• 马氏珠母贝TLRP基因克隆及其功能研究

  张美珍, 王志新, 吴羽媛, 梁海鹰,

  【目的】明确马氏珠母贝TLRP基因（PmTLRP）的组织表达特征及哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）刺激、植核及脂多糖（LPS）刺激后的时序表达特点，为进一步研究TLRs在马氏珠母贝中的免疫机制打下基础。【方法】采用RACE克隆PmTLRP基因cDNA序列，通过ProtParam、 ProtScale、 SignalP 4.0、 TMHMM v.2.0、 SMART、 SoftBerry Psite和SOPMA等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测PmTLRP基因在马氏珠母贝各组织中及经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后的表达情况。【结果】 PmTLRP基因cDNA序列全长2214 bp，包含33 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、135 bp的3'非编码区（3'-UTR）及2043 bp的开放阅读框（ORF），共编码681个氨基酸残基；其编码蛋白含有信号肽、富含亮氨酸重复序列 （LRRs）、跨膜结构域和TIR结构域，符合TLRs家族所具有的特征； PmTLRP氨基酸序列与其他物种的TLRs氨基酸序列存在一定相似性，其中与美洲牡蛎TLP氨基酸序列的相似度较高。PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达，以在肝胰腺中的相对表达量最高，显著高于在其他组织中的相对表达量 （PPmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量于注射刺激后12 h开始上调，至注射刺激后16 h达最大值，约是注射刺激前 （0 h）的19.0倍。经植核刺激后， PmTLRP基因相对表达量在植核后5~20 d呈逐渐上升趋势，于植核后30 d达最大值，约是植核前 （0 h）的6.4倍。在LPS刺激下， PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量先上升后下降，至注射刺激后3 h达最大值，约是对照组的5.0倍； PmTLRP基因在肝胰腺中的相对表达量呈升高→降低→升高→降低→升高的波动变化趋势，至注射刺激后24 h相对表达量上调到最大值，约是对照组的6.0倍。【结论】 PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达，但表达水平存在差异，经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后呈明显上调表达趋势，说明TLRP在马氏珠母贝的免疫防御反应中扮演重要角色。

• 血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备

  韦悠, 谢芝勋, 邓显文, 李小凤, 谢志勤, 范晴, 张艳芳, 黄娇玲, 王盛,

  【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒（FAdV-4） Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体，为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化，截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段， PCR扩增其基因序列，连接至pET-32a（+）构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化，并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合，利用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛选阳性细胞株，再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统，获得大小约为67 kD的 Fiber-2截短蛋白，以包涵体的形式出现，经纯化后可获得单一的特异性条带，经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株（2C2、 4F6、 5A5、 6G10和10B5），其抗体分泌稳定性、特异性好，诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400，腹水抗体效价为1:320000~1:1280000，秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、 4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型，轻链为Kappa链； 5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型，轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系 （LMH）进行IFA检测，结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性，可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。

• 香港牡蛎幼虫运动、耗氧率、摄食率及趋光性研究

  张兴志, 官俊良, 何苹萍, 张立, 李蔚, 马元, 韦嫔媛, 彭金霞,

  【目的】测定香港牡蛎幼虫的运动速度、耗氧率、摄食率及趋光性等关键参数，为指导牡蛎人工育苗的集约化、精准化管理提供参考。【方法】通过莱卡显微镜和显微数码测量分析系统记录不同发育时期的香港牡蛎幼虫面盘直径和运动速度。通过静水系统试验测定不同发育时期的香港牡蛎幼虫单个个体的耗氧率和摄食率。通过不同光色诱集效果试验测定不同发育时期牡蛎幼虫的趋光效应。最后分析上述参数与生长性状 （即壳高）的相关性。【结果】香港牡蛎幼虫的运动速度为550~7500 μm/s，幼虫运动速度随壳高增高而增加，但当接近变态时，幼虫的运动速度则下降，幼虫壳高与运动速度相关方程为y=-0.0043x2+27.992x-1002.6， R2=0.9892。随着幼虫壳高增高，面盘直径也逐渐增大。幼虫壳高与面盘直径的线性关系为y=0.7867x-11.412， R2=0.9519。随着幼虫壳高增高，其耗氧率逐渐增加，单个幼虫的耗氧率为0.67~6.45 ng/h。香港牡蛎幼虫摄食率随着幼虫壳高增高呈先上升后下降的变化趋势，单个幼虫的摄食率范围为35~660 cells/h。不同发育阶段的牡蛎幼虫趋光性存在明显差异， D形幼虫趋向于白光［（29.47&#177;5.75） %］、蓝光［（20.24&#177;7.21） %］和紫光［（19.94&#177;3.90） %］，壳顶幼虫趋向于白光［（24.88&#177;7.54） %］、绿光［（24.10&#177;8.31） %］和蓝光［（22.05&#177;4.26） %］，眼点幼虫则趋向于蓝光［（37.80&#177;4.59） %］、白光［（19.95&#177;5.33） %］和绿光［（15.85&#177;2.17） %］，但不同发育时期的牡蛎幼虫趋向于红光的比例最低。【结论】香港牡蛎幼虫的运动速度、耗氧率、摄食率与生长性状存在不同程度的相关性；白光、蓝光和绿光对香港牡蛎幼虫有一定的吸引作用，红光具有诱导香港牡蛎幼虫沉降的作用，为其人工育苗过程中幼虫的精准化培育管理、确定幼虫最优饵料投喂量提供依据，也为设施化高密度育苗设施构建提供参考。

• 犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备

  喻娇, 曹馨, 唐青海, 侯鑫军, 高翠翠, 韩涛涛, 黎露, 刘会敬, 唐斯萍,

  【目的】克隆犬转录因子ELF4基因（cELF4），体外表达重组cELF4蛋白（rcELF4）并制备抗该蛋白的卵黄抗体（IgY），为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因，将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序，运用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码的氨基酸序列特征。将cELF4基因克隆至原核表达载体pET-28a，构建重组表达质粒pET28a-cELF4，分别转化大肠杆菌BL21（DE3）和Rosetta（DE3）感受态细胞，诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。将rcELF4蛋白分别与3种免疫佐剂（ISA 15AVG、 ISA 71VG、 ISA 201VG）乳化制备免疫原，通过免疫蛋鸡检测抗体滴度和IgY含量。构建真核重组表达载体pEGFP-cELF4，转染细胞后，利用免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）分析cELF4特异性IgY的免疫活性。【结果】cELF4基因（GenBank登录号MZ198105）的开放阅读框（ORF）为1992 bp，编码663个氨基酸残基。cELF4基因与狐ELF4基因的核苷酸相似性最高 （99.3%），而与小鼠的相似性最低 （81.5%）。结合系统进化结果发现， cELF4基因与狐、大熊猫、欧洲雪貂、北美水獭等动物ELF4基因的亲缘关系较近，而与人和猴等灵长类动物及啮齿类鼠ELF4基因的亲缘关系相对较远。rcELF4蛋白分子量大小约100 kD，可刺激鸡产生相应抗体， ISA 15AVG、 ISA 71VG和ISA201VG组血清抗体滴度均在首免后38 d达峰值，其中ISA 201VG组效价最高 （>128000倍），且3组rcELF4特异性IgY抗体均在首免后14 d转阳，首免后35 d达峰值，其中ISA 201VG组血清抗体滴度最高，为256000倍。3组鸡蛋卵黄中所提取的IgY含量最高值为4.09 mg/10 mL卵黄液，与rcELF4蛋白呈特异性反应、且与人ELF4蛋白存在交叉反应。rcELF4蛋白定位在细胞核。【结论】 rcELF4蛋白在大肠杆菌中成功表达，且存在翻译后修饰现象，不同类型的免疫佐剂对rcELF4蛋白的免疫原性产生不同的影响，所制备rcELF4抗体免疫活性良好，且与人ELF4蛋白存在交叉反应。

• 广西乡村特色产业高质量发展评价指标体系构建

  高崇敏, 黄杰, 许忠裕, 林树恒, 刘勇, 梁茂杰, 唐海, 韦海丽,

  【目的】构建广西乡村特色产业高质量发展评价指标体系，有效提高广西乡村产业发展质量水平，为制定地区产业发展思路提供决策参考。【方法】基于109个县 （区） 65个特色产业的调研数据，通过分析不同因素对特色产业发展质量的影响确定评价指标并构建评价模型，运用层次分析法 （AHP）确定指标权重；利用构建的评价模型分析广西浦北香蕉产业和广西武鸣柑橘产业的发展质量，以检验其评价效果。【结果】广西乡村特色产业高质量发展评价指标体系包含资源条件、质量效益、科技支撑能力、产业组织化程度、产业加工能力、储运能力、品牌建设水平、支持保护力度等8个一级指标及53个二级指标。利用AHP对广西乡村特色产业高质量发展评价指标体系的各项指标进行赋值（权重），结果显示，资源条件为0.3480、质量效益为0.2138、科技支撑能力为0.1096、产业组织化程度为0.0624、产业加工能力为0.0637、储运能力为0.0237、品牌建设水平为0.0692、支持保护力度为0.1094。实证分析结果表明， 2019年广西浦北香蕉产业和广西武鸣柑橘产业整体发展质量较高，但均存在产业加工能力弱、储运能力差及品牌建设水平较低等问题；根据广西乡村特色产业高质量发展评价指标体系模型分析发现的主要问题及具体建议对相关特色产业进行相应的整改和调整，至2021年广西浦北香蕉产业和广西武鸣柑橘产业发展质量得到有效提高，产业加工能力、储运能力和品牌建设水平提高效果显著，其中广西武鸣柑橘产业2021年品牌建设能力增长幅度最高，达171.1%。【建议】客观认识资源条件等因素对广西乡村特色产业的影响，从加强主管部门监督检查、建立健全农业产业发展考核机制、吸引人才返乡等方面着手，着力推进广西乡村特色产业高质量发展。