南方农业学报杂志

南方农业学报杂志2022年第10期

• 以2b-RAD技术构建凡纳滨对虾遗传连锁图谱及生长性状QTL定位

  王怡悦, 刘红, 徐姚,

  【目的】构建凡纳滨对虾高密度遗传连锁图谱，并对生长相关性状进行QTL定位，筛选出生长性状相关候选基因，为后续开展凡纳滨对虾分子标记辅助育种、生长相关功能基因精细定位研究等提供理论依据。【方法】以耐低盐选育凡纳滨对虾为父本，厄瓜多尔野生凡纳滨对虾为母本，单尾交配，以2个亲本及150个F1代个体为作图群体，通过2b-RAD测序挖掘SNP分子标记并构建遗传连锁图谱；结合生长性状表型数据，使用MapQTL 6.0在构建的遗传连锁图谱上对体质量、全长、体长、头胸甲长、头胸甲宽、头胸甲高等13个生长相关性状进行QTL定位。筛选QTL区间SNP分子标记附近的基因，经GO功能注释及KEGG信号通路富集分析，挖掘生长相关候选基因；并采用实时荧光定量PCR检测候选基因在凡纳滨对虾不同组织及不同群体间的表达情况。【结果】构建的凡纳滨对虾遗传连锁图谱包括3136个SNPs标记，分布在44个连锁群上；总图谱全长为5430.54 cM，平均图距为1.73 cM。生长性状QTL定位共产生79个生长性状相关QTLs，LOD范围为3.00~11.04，可解释的表型变异范围为9.0%~28.8%。根据GO功能注释及KEGG信号通路富集分析结果，最终筛选出4个生长相关候选基因（TOB2、CRAT、CCT6、KLF4）。4个候选基因在凡纳滨对虾各组织中均普遍表达，且CCT6、KLF4和TOB2基因在耐低盐选育家系群体中的相对表达量均高于常规的凡纳滨对虾群体，其中CCT6基因表达差异达显著水平（PCCT6、KLF4、TOB2和CRAT）。可见，以2b-RAD技术结合QTL定位能高效、快捷挖掘出凡纳滨对虾生长性状相关候选基因，为开展分子标记辅助育种、生长相关功能基因精细定位研究等提供技术支持。

• 幼虫、青年和成年日本医蛭不同生长阶段差异表达基因比较分析

  闫秀营, 任可, 马晓聪, 单会荃, 郑雅琳, 刘庆友, 周维官, 郑景辉,

  【目的】筛选出调控日本医蛭生长发育的相关基因，揭示其生长发育、繁殖和抗凝分子机制，为后期开展日本医蛭养殖、生长发育及相关功能基因研究提供科学依据。【方法】以幼虫期（孵化10 d以内，HNL）、青年虫期（孵化后2个月左右，HNY）和成年虫期（孵化后2年左右，HNA）的日本医蛭为研究对象，利用Illumina HiSeq 4000平台对构建的cDNA文库进行转录组测序，按错误发现率（FDR）2 FC|>1的原则筛选差异表达基因（DEGs），并进行GO功能注释分析和KEGG信号通路富集分析。【结果】使用3个时期的样本构建24个cDNA文库，共产生541124257条原始序列（Raw reads），经Fastp质量控制及RNA-Seq组装，共获得20430个mRNAs转录本，并注释出88个新的mRNAs转录本。通过对日本医蛭不同生长阶段进行两两对比，共获得1348个差异表达基因，其中，在幼虫期—青年虫期（HNL vs HNY）中获得238个差异表达基因，在幼虫期—成虫期（HNL vs HNA）中获得976个差异表达基因，在青年虫期—成虫期（HNY vs HNA）中获得763个差异表达基因。幼虫期—成虫期的差异表达基因主要富集蛋白水解、肌球蛋白复合体、细胞骨架、几丁质代谢过程及对伤害的反应等GO功能条目上，以及苯丙氨酸/酪氨酸/色氨酸生物合成、丙烯酰胺转移酶等KEGG信号通路上。说明日本医蛭幼虫在生长过程中大量摄食并通过消化、代谢和合成物质为自身发育提供能量，而成年日本医蛭发育成熟后与其生长发育相关的代谢过程下调，且已适应环境，对于环境刺激的敏感度也有所降低。【结论】在幼虫期—成虫期（HNL vs HNA）获得的976个差异表达基因中，上调差异表达基因主要与肌肉发育相关，而与性腺发育或产卵调节及神经发育相关的差异表达基因具有明显周期特异性，其表达变化均与日本医蛭的生长发育有关。水蛭素和抗凝相关基因在青年期高表达，因此开展水蛭抗凝血能力研究时宜选用青年日本医蛭。

• 基于eDNA宏条形码技术的喀斯特高原人工湖泊鱼类多样性分析

  许龙飞, 姚邓雕, 杨原伟, 郭星辰, 李君轶, 姜海波, 安苗, 董响红, 邵俭,

  【目的】利用eDNA宏条形码技术探究喀斯特高原人工湖泊鱼类多样性，并综合评估环境因子对鱼类分布的影响，为喀斯特地区水域鱼类多样性评估提供新方法、新思路，也为红枫湖和阿哈湖鱼类保护管理措施的制定积累基础资料。【方法】以红枫湖和阿哈湖为代表采集水样，以Tele 02硬骨鱼类通用引物PCR扩增eDNA，在Illumina NovaSeq 6000测序平台完成高通量测序；对优质序列按照98%相似性进行OTU聚类，生成OTUs表格，通过基因注释获得鱼类物种信息，并以R语言分别进行PerMANOVA分析和冗余分析（RDA）。【结果】在红枫湖鉴定出鱼类32种，隶属于5目11科27属，其中鲤形目鱼类18种，红枫湖南、北湖鱼类群落结构差异不显著（R2=0.08，P=0.562>0.05）；在阿哈湖鉴定到鱼类33种，隶属于6目12科28属，其中鲤形目鱼类18种，各采样点检出鱼类总数差异不明显，保持在28~32种。现阶段的红枫湖和阿哈湖鱼类组成以鲤形目鱼类为主，但存在以日鲈目为主的养殖鱼类生态入侵。红枫湖环境因子与鱼类群落结构差异的决定系数（R2）排序为溶解氧（DO）>总溶解固体（TDS）=水温（WT）>pH>离子氨（NH4+），DO（P=0.034）是引起红枫湖各采样点鱼类群落结构差异的主要环境因子；阿哈湖环境因子与鱼类群落结构差异的决定系数（R2）排序为TDS>WT>Tra>NH4+>DO，TDS（P=0.005）是引起阿哈湖各采样点鱼类群落结构差异的主要环境因子。【结论】现阶段的红枫湖和阿哈湖鱼类组成以鲤形目鱼类为主，但存在以日鲈目为主的养殖鱼类生态入侵。eDNA宏条形码技术在喀斯特高原水域鱼类多样性评估方面具有较好的适应性，可快速监测到鱼类群落结构和空间分布，但通用引物可能对某些鱼类存在扩增偏好性；此外，不同人工湖泊水质理化因子特异性较强，研究环境因子与湖泊鱼类群落的关系时应对每个湖泊单独进行评估。

• 20种溪蟹线粒体COI基因比较分析及系统发育研究

  刘东东, 高佳怡, 张璐瑶, 龚理,

  【目的】比较分析20种溪蟹的线粒体COI基因序列，并基于COI基因序列构建溪蟹科系统发育进化树分析不同种类间的亲缘关系，探究COI基因作为分子标记在溪蟹物种鉴定中的适用性，同时为溪蟹科的物种鉴定及系统发育研究提供理论依据。【方法】测定2种龙溪蟹属（Longpotamon）代表种的线粒体COI基因全序列，结合GenBank中已公布的18种溪蟹科COI基因全序列，利用MEGA X计算其碱基组成、保守位点和遗传距离，采用MatGAT 2.02进行多序列相似性比较分析，并以PhyloSuite构建贝叶斯树（BI）和最大似然树（ML），探究溪蟹科物种内部的亲缘关系。【结果】20种溪蟹的COI基因序列全长1534~1539 bp，连续编码511~512个氨基酸残基，所有物种均以ATG为起始密码子；碱基含量略有不同，分别为35.9%~40.7%（T）、16.4%~20.2%（C）、26.8%~28.9%（A）和14.7%~17.2%（G），呈明显的AT偏向性。COI基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列比较分析结果显示分别有577和98个变异位点，表明密码子存在简并性。20种溪蟹的线粒体COI基因遗传距离、序列相似性及系统发育进化分析结果均显示，长安龙溪蟹（Longpotamon changanense）与龙溪蟹未定种（Longpotamon sp.）的亲缘关系最近。虽然采用不同方法基于不同数据集构建的系统发育进化树在拓扑结构上有所不同，但所有树型均显示龙溪蟹属（Longpotamon）的小龙溪蟹（L.parvum）并未与该属其他物种聚类在一起，华溪蟹属（Sinolapotamon）、近溪蟹属（Potamiscus）和小石蟹属（Tenuilapotamon）物种也散布在系统发育进化树不同分支中，暗示这些物种在分类鉴定上为非单系群，还需进一步研究确定。【结论】20种溪蟹的线粒体COI基因序列平均种间遗传距离为0.173，均具有区别于其他种类的特异位点，即线粒体COI基因序列可作为溪蟹科物种鉴定的分子标记。

• 基于SCoT分子标记的黄河鲤抗嗜水气单胞菌不同群体遗传多样性分析

  张岚, 姜淑泓, 陈玉函, 常乐, 管俊翔, 林强, 于淼, 乔志刚, 王磊,

  【目的】基于SCoT分子标记探讨黄河鲤遗传多样性与其抗嗜水气单胞菌能力的关系，为黄河鲤的抗病育种提供理论依据。【方法】通过腹腔注射对300尾黄河鲤进行人工感染嗜水气单胞菌，按死亡顺序分为最先死亡群体（FP）、最后死亡群体（LP）和存活群体（SP），每个群体选取30尾。从80条SCoT引物中筛选出多态性好、重复性高、条带清晰的引物，对3个黄河鲤群体进行多态性扩增，采用PopGene32和Arlequin 3.5计算3个群体的等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、Nei’s基因多样性指数（H）及Shannon’s信息指数（I）等遗传参数，基于Nei’s遗传距离（Ds）利用MEGA 7.0中的非加权组平均法（UPGMA）构建系统发育进化树，并以Structure 2.3进行群体间的遗传结构分析。【结果】黄河鲤感染嗜水气单胞菌的死亡率为40.0%。从80条SCoT引物中筛选出18条扩增条带清晰、多态性好的引物，从3个黄河鲤群体中共扩增出103条条带，其中多态性条带97条，占94.17%。3个黄河鲤群体的Na范围为1.7961~1.8155，Ne范围为1.3828~1.4029，H范围为0.2258~0.2467，I范围为0.3453~0.3804；群体间的遗传分化指数（Gst）为0.0972，即90.28%的遗传多样性分布在群体内部。3个黄河鲤群体的遗传分化指数（Fst）为0.1299，属于轻度遗传分化；群体间的Ds分布在0.0248~0.0835，其中FP群体与SP群体的遗传距离最大。基于Ds的UPGMA聚类分析结果显示，FP群体和LP群体聚为一支，SP群体单独聚为一支；遗传结构分析结果表明，3个黄河鲤群体可分为2个亚群［抗病群体（SP）和易感群体（FP和LP）］。可见，通过黄河鲤死亡时间划分的群体与通过聚类分析及遗传结构分析得出的群体基本一致。【结论】黄河鲤抗嗜水气单胞菌的能力随着群体遗传多样性的增大而增强。因此，在黄河鲤抗病品种（系）选育过程中应保证足够的群体数量，在提高生长、营养等经济性状的同时保证一定的基因杂合度。

• 八角茴香水提物调控宿主免疫反应抗石斑鱼虹彩病毒的机制研究

  李梦梦, 韦红玲, 刘明珠, 黄帅帅, 王太霞, 黄琳, 李鹏飞,

  【目的】从免疫应答角度探析八角茴香（Illicium verum Hook.f.）水提物（IVE）调控宿主免疫反应而发挥抗石斑鱼虹彩病毒（SGIV）的作用机制，为八角茴香应用于石斑鱼健康养殖产业及开发绿色、健康、高效渔用药物提供理论依据。【方法】通过光学显微镜观察及CCK-8细胞活力测定确定IVE的细胞安全工作浓度，利用实时荧光定量PCR检测IVE对宿主细胞干扰素相关基因（IFN、STAT1、PKR、ISG15、KKα、STING和IRF3）表达的影响，并以光学显微镜观察和实时荧光定量PCR分析IVE在细胞水平抗SGIV的效果，通过石斑鱼活体试验进一步验证IVE的抗SGIV效果。【结果】IVE细胞水平的安全工作浓度≤0.50 mg/mL； IVE预处理GS细胞2 h可显著（PPIFN、STAT1、PKR、IKKα、IRF3和STING）的表达。SGIV感染GS细胞24和48 h时，经IVE预处理的细胞病变效应（CPEs）明显少于未使用IVE预处理的GS细胞，且细胞内SGIV的MCP基因相对表达量极显著降低，表明IVE可有效抑制SGIV感染；此外，IVE可增强SGIV感染GS细胞中干扰素相关基因的表达，具体表现为IFN、STAT1和IRF3基因在病毒感染后24 h极显著上调，PKR、IKKα、ISG15和STING基因在病毒感染后24和48 h呈显著或极显著上调趋势。在石斑鱼活体试验中，IVE与SGIV混合腹腔注射后石斑鱼脾脏中SGIV的MCP基因相对表达量在病毒感染后24和48 h均极显著低于仅注射SGIV的石斑鱼。【结论】IVE具有抑制SGIV感染的功能，其作用机制可能是通过诱导干扰素相关基因表达而激活宿主的抗病毒状态，从而发挥间接抗SGIV效果；也说明八角茴香在水产疫病防控中具有研发成渔用抗病功能制剂的潜力。

• 2019—2020年海南海尾湾浮游植物与环境因子的调查分析

  贺长皓, 李亚军, 张秀霞, 曾茹, 黄晓晴, 费小雯, 邓晓东,

  【目的】明确海南海尾湾海域浮游植物群落组成及其与环境因子的相关性，为保护海尾湾海域浮游植物多样性和水体环境提供参考依据。【方法】于2019年7月（夏季）和9月（秋季）及2020年7月（夏季），对海南岛海尾湾近岸海域的12个固定采样点（站点）进行3个航次的水样采集调查，返航后对浮游植物的群落结构、水质及周边环境等进行鉴定和记录，并通过冗余分析（RDA）探究浮游植物群落结构与环境因子的相关性。【结果】2019—2020年的夏季航次采集水样共鉴定出浮游植物4门147种，以硅藻门种类（121种）为主，其次是甲藻门（18种）；优势种包括旋链角毛藻（Chaetoceros curvisetus）、菱形海线藻（Thalassionema nitzschioides）、佛氏海毛藻（Thalassiothrix frauenfeldii）、并基角毛藻（C.decipiens）、奇异棍形藻（Bacillaria paradoxa Gmelin.）、冰河星杆藻（Alexandrum catenclla）及拟旋链角毛藻（C.pseudocurvisetus）等；各调查站位浮游植物的平均细胞密度为17.50×104 cells/m3，Shannon-Wiener多样性指数（H'）介于3.07~4.33，Pielou均匀度指数（J'）介于0.58~0.85，丰富度指数（D）介于1.34~5.12。2019年秋季航次共鉴定出浮游植物3门86种，其优势种包括旋链角毛藻、拟旋链角毛藻、覆瓦根管藻（Rhizosolehia imbricata var.Schrubsolei）、细弱海链藻（Thalassiosira subtilis）、中华根管藻（Rhizosolenia sinensis）及菱形海线藻等；各调查站点浮游植物的平均细胞密度为53.80×104 cells/m3，H'介于1.80~3.35，J'介于0.33~0.63，D介于1.66~3.39。影响海尾湾海域浮游植物的重要环境影响因子是水温、SiO4和NH4-N；RDA分析结果表明，旋链角毛藻群落结构与SiO4和COD呈正相关，而拟旋链角毛藻群落结构与水温、化学需氧量（COD）和pH呈正相关。【结论】2019年夏季—2020年夏季海南海尾湾海域的水生环境良好，浮游植物物种丰富度高，影响海尾湾海域浮游植物的重要环境影响因子是水温、SiO4和NH4-N。因此，在掌握海尾湾海域内环境因子与浮游植物种群结构间的相互关系后，应定期重点监测海尾湾海的SiO4和NH4-N变化，避免赤潮发生，同时更需要有针对性地对海水养殖业废水及生活污水进行检测和治理。

• 花䱻抗缪勒氏管激素基因克隆、抗体制备及其对外源雌激素的响应

  张李敏, 郭琦, 王向斌, 黄茜, 李学军, 周传江, 赵道全, 张建新, 刘慧芬,

  【目的】克隆花䱻抗缪勒氏管激素基因Amh，分析其序列特征及亚细胞定位，检测不同浓度雌二醇处理下的表达变化规律，为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供理论参考。【方法】基于花转录组文库测序结果，克隆Amh基因cDNA序列，并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-Amh，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白的亚细胞定位情况。同时，利用实时荧光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花䱻Amh基因cDNA序列全长为1849 bp，开放阅读框（ORF）为1671 bp，编码556个氨基酸残基。系统进化分析结果显示，花䱻Amh基因与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类Amh基因聚为一支，表明其亲缘关系较近。将纯化的AMH重组蛋白免疫小鼠以制备AMH多克隆抗体，通过酶联免疫方法（ELISA）检测其抗体效价为2.4×106以上，Western blotting检测显示抗体具有特异性。AMH蛋白在花卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花䱻60 d后发现，低浓度雌二醇（100 μg/g）促进花䱻卵母细胞生长，卵巢内皮质液泡数量增多。经雌二醇处理后，卵巢中Amh基因的表达量降低，说明雌激素在卵巢发育中对Amh基因表达具有抑制作用。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域，在卵巢颗粒细胞表达，且响应雌激素的调控，可能在花䱻卵巢发育中发挥调控作用。

• 盐碱胁迫对莫桑比克罗非鱼TauT2基因表达的影响

  李娅娅, 苏换换, 马冬梅, 樊佳佳, 朱华平,

  【目的】研究在莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）中新发现的编码牛磺酸转运蛋白的基因TauT2在盐碱胁迫下对鱼体渗透压调控的作用，为深入阐明鱼类中牛磺酸转运蛋白的功能提供更全面可靠的数据。【方法】通过PCR和直接测序的方法对TauT2基因的编码区序列（CDS）进行分析，用生物信息学分析方法预测其编码蛋白的氨基酸序列及其高级结构，并利用荧光定量PCR检测该基因在肝、肠、肌肉等13个组织中的表达特征，以及在盐碱胁迫（盐25 g/L，碱4 g/L） 96 h内，不同时间点鳃、肾、肠和肝组织中TTauT2基因mRNA的表达水平。【结果】获得的TauT2基因CDS序列全长1881 bp，共编码626个氨基酸，氨基酸序列与斑马拟丽鱼（Maylandia zebra）牛磺酸转运蛋白的一致性最高，为98.72%，与已报道的莫桑比克罗非鱼的tTAUT1蛋白一致性为88.52%，该蛋白具有典型的牛磺酸转运蛋白跨膜结构域。荧光定量PCR结果表明，TauT2基因在肝、肠、肌肉等13个组织均有表达，其中血液中表达量最高，肠中的表达量最低。盐碱胁迫条件下，TauT2基因mRNA表达水平在鳃、肾、肠和肝组织中的表达均呈先升高再下降的变化趋势，鳃和肝达峰值的时间为48 h，肾和肠达峰值的时间分别是24和72 h，达峰值的时间与莫桑比克罗非鱼的tTauT1基因存在明显差异。【结论】莫桑比克罗非鱼在受到盐碱胁迫后，通过提升TauT2基因的表达量来有效调控体内渗透压，为渗透压稳态的维持发挥作用。莫桑比克罗非鱼体内至少有2种不同的牛磺酸转运蛋白，已发现的这2个蛋白氨基酸序列、三级结构及在鱼体不同组织中精细调节体内渗透压的功能存在一定差异。

• 聚肌胞苷酸刺激对鳜免疫因子活性及干扰素基因表达的影响

  徐俊, 王艳玲, 赵金良,

  【目的】比较聚肌胞苷酸（Poly I：C）刺激对鳜（Siniperca chuatsi）免疫因子活性及干扰素系统相关基因表达的影响，为判断和指导鳜养殖过程中病原刺激后免疫应答和病毒监测提供参考依据。【方法】采用Poly I：C模拟病毒刺激，比较注射后不同时序（0、3、6、12、24、36、48和72 h）鳜白细胞组成百分比，以双抗体夹心酶联免疫法检测补体蛋白水平变化，荧光PCR相对定量检测免疫相关基因表达变化。【结果】血液白细胞百分比中，血栓细胞>单核细胞>淋巴细胞>嗜中性粒细胞，其中，与对照组比较，处理组6~72 h单核细胞百分比极显著提高（PPIRF7基因表达量分别从3和6 h开始极显著上调，且胸腺表达量最高；处理组肾脏和肝脏IFNh基因表达量3~12 h极显著上调，胸腺IFNh基因表达量于6 h达峰值，12 h后恢复下降，脾脏IFNh基因表达在各时段均低于初始；处理组肾脏、胸腺、肝脏、脾脏IFNc基因表达量于12 h极显著上调，然后逐渐下降，分别于72、72、48和72 h达最低水平。【结论】鳜受Poly I：C模拟病毒刺激后，血细胞中各类白细胞、血清酶补体C3和C4含量有不同变化，干扰素在不同时序显著影响各组织中的表达变化。

• 氨氮慢性胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氨代谢相关指标及细胞凋亡的影响

  黄勇, 戴习林,

  【目的】探究在盐度3下氨氮慢性胁迫对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）氨代谢和细胞凋亡的影响，以期为凡纳滨对虾免疫机理研究和生产实践指导提供参考。【方法】将480尾初始体质量6.49±0.14 g的凡纳滨对虾分为4个组，6个平行，暴露于0（对照组）、0.9、5.2和12.0 mg/L的氨氮水体中，氨氮胁迫20和40 d后分别统计凡纳滨对虾体质量增长率和存活率，测定凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中氨代谢相关物质和酶活性、抗氧化酶活性及细胞凋亡相关基因表达量，同时取肝胰腺制作石蜡切片进行Tunnel染色。【结果】随氨氮浓度增加，体质量增长率和存活率逐渐降低，血淋巴氨氮和尿素氮含量逐渐升高，胁迫20 d与胁迫40 d结果相近；肝胰腺谷氨酸脱氢酶（GDH）、谷氨酰胺合成酶（GS）和过氧化氢酶（CAT）活性在氨氮胁迫20 d升高，在氨氮胁迫40 d时5.2和12.0 mg/L组酶活性降低；氨氮胁迫20 d，12.0 mg/L组的肝胰腺总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性显著低于对照组（PCyt C和Caspase-3基因表达量显著高于对照组。TUNEL检测结果显示，细胞凋亡数量随氨氮浓度增加而增加，且氨氮胁迫40 d较20 d更多。【结论】经氨氮慢性胁迫后，环境氨氮扩散到血淋巴中，凡纳滨对虾血淋巴氨氮累积越多，尿素氮含量随之增加，肝胰腺谷氨酰胺合成途径受到抑制，氨代谢受到阻碍，应激产生的活性氧超出抗氧化系统调节范围，对肝胰腺造成损伤，诱导细胞凋亡发生，对凡纳滨对虾生长存活造成不利影响。

• 绿狐尾藻和空心菜对模拟池塘养殖尾水的净化效果分析

  徐鹏, 张紫英, 李文红, 温晴宇, 徐紫娟, 杨卓,

  【目的】探究绿狐尾藻（Myriophyllum elatinoides Gaudich）和空心菜（Ipomoea aquatica Forsk）在漂浮环境培养条件下对不同氮磷水平养殖尾水的适应性及对氮磷营养的吸收和去除效果，为促进2种植物在池塘养殖尾水处理中的推广应用提供参考。【方法】以绿狐尾藻和空心菜为供试植物，设总氮（TN）和总磷（TP）浓度分别为5、10、15 mg/L和1、2、3 mg/L的低（A）、中（B）、高（C）3组模拟养殖尾水，比较2种植物在培养42 d时的生物量、氮磷累积量，以及对水体氮磷的去除能力。【结果】绿狐尾藻在A、B、C组持续生长42 d，其42 d净增生物量和氮磷累积量随生长时间延长、水体氮磷浓度增加而增加，最大值出现在C组；空心菜在A、B、C组正常生长28 d，其42 d净增生物量和氮、磷累积量随水体氮磷浓度增加而下降，最大值出现在A组。在42 d的试验期内，绿狐尾藻对水体氨氮（NH4+-N）、TN、活性磷（SRP）和TP的去除率最高，氮磷去除效果随水体氮磷浓度增加而上升且去除氨氮能力最强，最大值出现在C组；空心菜的氮磷去除效果随水体氮磷浓度增加而降低，且28 d后植株生长和去除能力下降。植物氮磷吸收贡献率结果显示，3组模拟养殖尾水中，绿狐尾藻植物吸收的氮磷贡献率介于33.65%~99.82%，高于空心菜的2.34%~62.21%。绿狐尾藻对低、中、高氮磷水平模拟养殖尾水的适应性优于空心菜；植物吸收是绿狐尾藻去除水体氮磷的主要途径。【结论】绿狐尾藻对水体氮磷的适应范围较广，表现为喜高氮磷，对水体氮磷水平的适应能力、生长和水体净化能力优于空心菜，可用于南方池塘养殖尾水的长期净化，应用潜力优于空心菜。空心菜的生长和对水体氮磷的去除效果随水体氮磷浓度增加而降低，应用于夏秋季池塘养殖尾水处理时宜定期收割以保证净化效果。

• 无乳链球菌感染方式对罗非鱼血常规和抗体消长规律的影响

  顾海闻, 农源, 蒋薇, 王冬英, 梁万文, 陈汉忠, 吴文德,

  【目的】明确表皮损伤或某种原因造成的炎症是否是罗非鱼无乳链球菌病暴发的重要诱因，为罗非鱼养殖业疫情预警及无乳链球菌疫苗研制提供参考依据。【方法】将180尾体质量约40 g的吉富罗非鱼随机分为健康组、皮肤创伤组和肠炎组，通过浸泡方式感染无乳链球菌（1.5&#215;106 CFU/mL），分别设3个对应的空白对照组（不感染无乳链球菌）。无乳链球菌感染前及感染后24、48、72、96、120、144和168 h等8个时段，分别每组随机挑选15尾罗非鱼采血，将血液涂片后以吉姆萨染色，观察细胞形态并统计外周血白细胞、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞数量，同时记录罗非鱼死亡数量。每周以ELISA测定1次罗非鱼血清IgM抗体水平，持续10周。【结果】与健康组罗非鱼相比，皮肤创伤组和肠炎组罗非鱼死亡时间提前，存活率显著降低（PP<0.01，下同），说明无乳链球菌感皮肤创伤或患有肠炎的罗非鱼相对于健康鱼能引起更强烈的免疫反应；皮肤创伤组罗非鱼的外周血单核细胞数量在感染后72~168 h均极显著高于健康组罗非鱼，而肠炎组罗非鱼只在感染后24 h极显著高于健康组罗非鱼。相对于健康组和皮肤创伤组罗非鱼，肠炎组罗非鱼血清抗体水平上升时间更早，持续高水平时间更长；健康组和皮肤创伤组的罗非鱼血清特异性抗体出现时间相近，但皮肤创伤组罗非鱼抗体维持高水平的时间更长。【结论】罗非鱼在无乳链球菌感染前后并发机械性或免疫性病理损伤及炎症，会导致感染死亡率升高，即感染无乳链球菌后会加重因转池、运输、寄生虫感染等造成鱼体表皮受损，或饲料霉变等原因造成的肠炎，进而导致罗非鱼死亡率上升。血常规和抗体水平的消长规律能反映罗非鱼无乳链球菌的感染情况，其中，外周血白细胞数量变化可作为判断罗非鱼感染无乳链球菌后病理损伤和免疫应答的参考指标。

• 10月龄波纹龙虾形态性状对体质量的相关性及通径分析

  汪迎港, 周胜杰, 肖博, 赵旺, 何雨航, 于刚, 马振华,

  【目的】分析10月龄波纹龙虾（Panulirus homarus）形态性状对其体质量的影响，为波纹龙虾优良形态性状的选择育种提供参考。【方法】测量51尾10月龄波纹龙虾的体质量（Y）和体长（X1）、头胸甲长（X2）、头胸甲宽（X3）、头胸甲高（X4）、腹部长（X5）、第一腹宽（X6）、第一腹高（X7）7个形态性状，利用多元回归分析10月龄波纹龙虾形态性状与体质量的相互关系，经相关分析和通径分析找出体质量的主要影响性状，结合逐步回归分析建立10月龄波纹龙虾形态性状对体质量的回归方程，筛选出最优拟合曲线模型。【结果】10月龄波纹龙虾7个形态性状间均存在极显著相关性（PX1）、头胸甲长（X2）和头胸甲高（X4）对体质量的影响均达显著（PY=-444.692+1.141X1+5.943X2+2.347X4。将回归方程中保留的X1、X2和X43个形态性状分别与体质量进行曲线模型拟合，10种曲线模型拟合结果均达极显著水平，说明曲线拟合获得的模型均有意义。从拟合结果来看，X1、X2、X4对体质量的最优拟合模型分别为指数函数、三次函数和幂函数，其公式分别为Y=9.344e0.018X1、Y=-0.029X22+0.001X2+61.131、Y=0.3X42.35，对应的R2分别为0.892、0.936和0.805。【结论】体长、头胸甲长和头胸甲高对波纹龙虾体质量有显著的影响，在以体质量为主要指标进行苗种繁育和亲本选育时，应以头胸甲长为主要选择性状，体长和头胸甲高为辅助选择性状。

• 合浦绒螯蟹性腺和肌肉营养成分分析

  马世新, 方怀义, 代展鹏, 王玉军, 李燕, 张艳秋,

  【目的】探究合浦绒螯蟹的营养品质，对其性腺和肌肉营养成分进行分析，为其营养价值评价提供科学依据。【方法】选取体质健康的合浦绒螯蟹雌雄各30只，测定其形体指数，性腺和肌肉常规营养成分、氨基酸及脂肪酸含量。【结果】合浦绒螯蟹雌蟹的总可食率和性腺指数显著高于雄蟹（PP>0.05，下同）。雌蟹性腺的粗蛋白和粗脂肪含量较雄蟹分别显著增加57.60%和1546.30%，肌肉的粗蛋白和粗脂肪较雄蟹分别显著增加3.90%和22.81%。雌蟹性腺必需氨基酸（EAA）、非必需氨基酸（NEAA）、总氨基酸（TAA）和鲜味氨基酸（DAA）含量均显著高于雄蟹，分别增加85.99%、21.61%、41.24%和13.74%；雄蟹肌肉必需氨基酸含量（62.09 mg/g）显著高于雌蟹（60.27 mg/g），增加3.02%，而总氨基酸和鲜味氨基酸含量无显著差异。依据氨基酸评分（AAS）标准和化学评分（CS）标准分值，以AAS进行评价时，合浦绒螯蟹肌肉和性腺的第一限制性氨基酸为缬氨酸，第二限制性氨基酸为蛋氨酸+半胱氨酸；以CS进行评价时，肌肉和性腺的第一限制性氨基酸为蛋氨酸+半胱氨酸，第二限制性氨基酸为缬氨酸。雄蟹肌肉必需氨基酸指数（85.12）高于雌蟹（79.13），而雌蟹性腺必需氨基酸指数（89.35）高于雄蟹（77.01）。雄蟹性腺的饱和脂肪酸（SFA）和多不饱和脂肪酸（PUFA）总量显著高于雌蟹，分别增加26.25%和11.93%，而肌肉中二者无显著差异；雌蟹性腺和肌肉的单不饱和脂肪酸（MUFA）总量显著高于雄蟹，分别增加23.01%和9.38%；雄蟹性腺和肌肉的二十碳五烯酸+二十二碳六烯酸（EPA+DHA）含量（15.15%和13.08%）均显著高于雌蟹（13.18%和10.97%），雄蟹肌肉不饱和脂肪酸∑n-3/∑n-6比值（1.06）显著高于雌蟹（0.86）。【结论】合浦绒螯蟹雌蟹的总可食率、肌肉和性腺的蛋白质与脂肪含量及性腺氨基酸营养价值优于雄蟹，而雄蟹肌肉的必需脂肪酸营养价值优于雌蟹。因此，合浦绒螯蟹是富含优质脂肪酸和均衡氨基酸的大型食用蟹类。

• 养殖鳗鲡拟指环虫病的研究与控制现状

  樊海平, 张晶晶, 林煜, 钟全福, 卓玉琛, 林而舒,

  拟指环虫在鳗鲡的寄生呈全球性分布，已成为日本鳗鲡、欧洲鳗鲡、美洲鳗鲡、澳洲鳗鲡等养殖鳗鲡的主要寄生虫之一，虫体大量寄生及驱虫药物大量使用导致鱼体应激，进而引发其他疾病，给鳗鱼养殖业带来巨大经济损失。文章通过综述鳗鲡寄生拟指环虫的分类地位、主要种类及感染宿主，在鳗鲡养殖过程中的流行趋势及虫体寄生宿主出现的主要症状和病理变化，以及驱虫药物的驱虫效果研究和拟指环虫病防控技术现状，发现在鳗鲡拟指环虫病有效防控方面仍然困难重重，尤其缺乏特效的防治药物，药物使用应激性产卵后导致二次感染的现象普遍存在，且拟指环虫对美洲鳗鲡、欧洲鳗鲡等的特异性选择机制及药物使用后耐药性产生的机制尚不清楚，虫体体外培养技术也未成熟，因此亟待研究拟指环虫离体培养模型，建立拟指环虫人工感染和传代系统，开展鳗鲡拟指环虫低毒性、低残留等安全控制药物的研制及口服驱虫药物的研发，并基于水体温度、pH、水流速、生物天敌等进一步加强拟指环虫生态防控技术和免疫防控技术研究，为鳗鲡产业的可持续健康发展提供有力技术保障。

• 水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14启动子克隆及时空表达特性分析

  李泓雨, 张林, 聂圣松, 杨过, 杭俊楠, 黄玮婷, 方中明, 查仁明,

  【目的】克隆水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14的启动子序列并分析其时空表达特性，为解析氨基酸转运基因生物学功能及了解水稻对有机氮源的响应和氨基酸吸收利用提供理论依据。【方法】PCR扩增OsAAP14基因的启动子序列，并与pCAMBIA1391Z空载体质粒连接构建出启动子-GUS表达载体，并通过农杆菌介导侵染水稻中花11愈伤组织，获得OsAAP14基因的启动子-GUS转基因植株，通过对转基因植株不同组织部位进行GUS染色，并采用石蜡切片技术观察各组织细胞部位表达，经5种不同氨基酸处理后进行根部GUS染色，结合实时荧光定量PCR检测OsAAP14基因在GUS染色部位的相对表达量，最后综合分析该基因的时空表达特性。【结果】克隆获得OsAAP14基因启动子序列为1993 bp，与参考序列日本晴OsAAP14（LOC_Os04g56470）序列一致。该启动子序列含有MBS、P-box、ABRE、CGTCA-motif等激素或胁迫响应元件。从OsAAP14基因的启动子-GUS植株T0代中鉴定获得16个阳性转基因株系。T1代材料不同组织部位GUS染色及实时荧光定量PCR结果均显示，OsAAP14基因在水稻芽伸长的基部和叶片相对表达量较高，在根、叶鞘和穗也有一定表达，但在茎中的相对表达量最低。石蜡切片分析结果显示，OsAAP14基因在根部皮层薄壁细胞、叶片的叶肉细胞、穗的颖壳内部细胞有较高的表达。碱性氨基酸的组氨酸处理下根中的OsAAP14基因表达量随着处理时间的增加显著提高（POsAAP14基因相对表达量也显著提高。【结论】OsAAP14基因在水稻不同组织均有表达，正常情况（未处理）下在水稻基部和叶片中相对表达量较高，但外源氨基酸和激素处理时，在根中该基因被诱导表达上调，说明OsAAP14基因正常情况下可能主要参与调控水稻地上部分氨基酸的运输，但当外界氨基酸和激素含量增加时则参与调控水稻根部氨基酸的运输。

• 利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代

  吴圣进, 陈雪凤, 刘增亮, 张雯龙,

  目的】利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代，为香菇分子辅助育种提供技术支撑。【方法】通过ISSR分析获得标识供体亲本菌株YX7两个细胞核的特异性条带，根据特异性条带序列设计SCAR引物，对菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株进行SCAR-PCR鉴别，并采用传统镜检和拮抗测试方法进行验证。【结果】筛选出分别标识供体菌株YX7两个细胞核核型的特异性条带a和b，据此设计的SCAR引物PA和PB分别对供体菌株YX7的2个不同细胞核具有特异性扩增作用。SCAR-PCR鉴定结果显示，40个待测菌株中，27个菌株为杂合子，其中19个菌株具有a条带标识核型，8个菌株具有b条带标识核型；13个菌株为非杂合子，其中11个菌株同时具有条带a和b标识的两个核型，是菌株YX7本身，另外2个菌株两种核型均未被检测出，属于菌株808的孢子单核体。传统方法验证结果与SCAR分子标记鉴定结果完全一致。与传统方法相比，SCAR标记方法更简便高效、结果更稳定可靠，并可通过核型标识进一步将杂合子分为两组。【结论】SCAR分子标记能高效、全面和精准鉴别香菇双单杂交菌株的杂合子和非杂合子，可应用于香菇杂交分子辅助育种和遗传分析。

• 灵芝属真菌线粒体基因组特征及进化

  刘潮, 盛妍妍, 姜斌, 卢旗阳, 韩利红,

  【目的】分析灵芝属（Ganoderma）真菌的线粒体基因组特征及进化，为灵芝属物种分类、分子进化和系统发育分析提供理论依据。【方法】基于灵芝属真菌15个线粒体基因组序列，利用MEGA X、MISA、mVISTA、MAFFT、DnaSP、PAML X和IQ-TREE等生物信息学软件对基因组特征、序列多态性、简单重复序列（SSR）、基因进化和系统发育进行分析。【结果】灵芝属真菌线粒体基因组全长为50603~124588 bp，GC含量为25.4%~27.3%，含有15个保守的蛋白编码基因（PCG）、2个rRNA基因和25~29个tRNA基因。SSR主要由AT构成，单核苷酸重复类型比例最高，其次为三核苷酸重复和四核苷酸重复。种间线粒体基因组序列差异较大，非编码区的变异水平高于编码区，nad6、nad3和cob基因编码序列的变异度较高，内含子长度与线粒体基因组大小呈显著正相关。15个保守的线粒体蛋白编码基因主要受纯化选择影响，其中cob、cox1和nad2基因含有正选择位点。基因编码偏好A/T含量高的密码子，27个高频密码子中，13个以A结尾，14个以T结尾。系统发育分析结果显示，灵芝属真菌主要分为2个聚类组，其中紫芝、狭长孢灵芝和G.wiiroense聚为一组；喜热灵芝、白肉灵芝和铁杉灵芝聚成一支，与树舌灵芝、梅氏灵芝、四川灵芝和亮盖灵芝构成姊妹类群，共同构成另一组。【结论】灵芝属真菌的线粒体基因组在进化过程中发生明显的遗传变异，基因组长度主要与内含子插入和删除有关，蛋白编码基因密码子使用偏性强。

• 小麦耐高温特性的生理机制与基因挖掘研究进展

  齐学礼, 赵明忠, 尹文生, 李莹, 郭瑞, 焦竹青, 张煜,

  高温是小麦生产上经常发生的一种非生物逆境，严重影响小麦产量和品质形成。研究小麦耐高温的生理机制，挖掘小麦耐高温基因一直是国内外研究的重点和热点。文章总结了高温对小麦光合作用、细胞膜稳定性、渗透调节物质含量、活性氧清除系统活性、叶绿素合成等生理性状的影响；归纳了已定位的耐高温相关性状QTL，包括穗数、穗粒数、千粒重等产量相关性状，可溶性糖含量、冠层温度、叶绿素含量、叶绿素荧光参数等生理相关性状；概括了已发现可提高小麦耐高温特性的基因，主要为小麦耐高温相关转录因子。针对目前小麦耐高温功能基因研究相对滞后的现状，提出今后应加强耐高温小麦新材料创制和耐高温表型精准鉴定技术体系构建研究，为耐高温基因挖掘与新品种培育提供坚实的材料与技术支撑；以六倍体小麦参考基因组序列释放为契机，加快小麦耐高温基因克隆进程，为耐高温小麦新品种培育提供基因资源；加强基因编辑与转基因技术在小麦耐高温育种中应用，实现对小麦耐高温特性的精准定向改良。

• 山地玉米植株及田间草地贪夜蛾幼虫的空间分布特征

  王锟, 张丽兰, 黎斌, 杜广祖, 陈斌,

  【目的】明确草地贪夜蛾幼虫在山地玉米植株上的空间分布特征，为草地贪夜蛾的预测预报、抽样调查和防治提供理论依据。【方法】以云南省曲靖市师宗县龙庆乡山地玉米种植区为调查研究点，设置系统调查田3块，每块田采用W型五点调查取样法，调查并记录不同生育期和不同部位玉米植株上草地贪夜蛾不同龄期幼虫数量；采用聚集指标、Iwao回归分析法和Taylor幂法则等方法分析山地玉米田草地贪夜蛾幼虫的空间分布格局，并基于空间分布结果，进一步拟合提出幼虫密度的理论抽样模型和基于幼虫密度防治指标的序贯抽样技术。【结果】不同生育期玉米植株上草地贪夜蛾各龄期幼虫的组成不同。除1龄幼虫在雄穗上无分布外，各龄期幼虫在玉米不同部位上均有分布，幼虫数量由大到小的分布顺序为心叶>雌穗>茎/叶>雄穗。玉米齐苗期、拔节期、大喇叭口期和吐丝期草地贪夜蛾低龄幼虫数量比例较高，分别为100.00%、71.45%、63.39%和78.07%，抽雄期、散粉期、灌浆期、乳熟期和蜡熟期草地贪夜蛾高龄幼虫数量比例较高，分别为70.01%、83.55%、81.35%、95.94%和95.56%；玉米心叶和雌穗上虫量占比较高，分别为37.73%和34.49%，其中雌穗虫量最高达237.78头/100穗；草地贪夜蛾低龄幼虫在山地玉米田呈聚集分布，高龄幼虫呈均匀分布；综合来看，山地玉米田草地贪夜蛾幼虫呈聚集分布，且聚集度具密度依赖性。基于空间分布的草地贪夜蛾低龄、高龄和全部幼虫样本的最佳理论抽样数计算模型分别为N = (\frac3.84D^2)(\frac3.2575m^2 + 0.2874)、N = (\frac3.84D^2)(\frac1.008m - 0.0644)和N = (\frac3.84D^2)(\frac1.4718m + 0.3370)，基于防治指标的低龄、高龄和全部幼虫样本的序贯抽样区间计算公式分别为T_\rmIwao(n) = 0.33n \pm 1.96\sqrt 1.1063n 、T_\rmIwao(n) = 0.33n \pm 1.96\sqrt 0.3257n 和T_\rmIwao(n) = 0.33n \pm 1.96\sqrt 0.5224n 。【结论】云南山地玉米田草地贪夜蛾低龄幼虫呈聚集分布，高龄幼虫呈均匀分布，整个生育期田间草地贪夜蛾幼虫总体呈聚集分布；可通过拟合的模型计算低龄和高龄幼虫取样的最佳理论抽样数及序贯抽样区间。

• 短稳杆菌对草地贪夜蛾的杀虫活性及其体内解毒酶的影响

  武怀恒, 向礼波, 李文静, 许敏, 姜理涛, 许冬, 丛胜波, 万鹏,

  【目的】明确生物农药短稳杆菌对草地贪夜蛾的杀虫活性及其体内解毒酶活性的影响，为草地贪夜蛾的高效绿色防控提供理论依据。【方法】采用叶片浸渍法测定短稳杆菌对草地贪夜蛾1、2和3龄幼虫的室内杀虫活性；通过喷雾法测定短稳杆菌对草地贪夜蛾的田间控制效果；以短稳杆菌亚致死剂量处理草地贪夜蛾幼虫，利用酶标仪检测幼虫体内解毒酶（谷胱甘肽S-转移酶、羧酸酯酶）和乙酰胆碱酯酶活性的变化。【结果】室内杀虫活性测定结果显示，短稳杆菌对草地贪夜蛾幼虫具有较强的毒杀作用，取食经1.00&#215;107孢子/mL短稳杆菌处理的玉米叶片72 h后，1、2和3龄幼虫的校正死亡率分别达86.21%、83.05%和58.33%。玉米田施用100亿孢子/mL短稳杆菌悬浮剂800和1000倍液7 d后，对草地贪夜蛾的防治效果分别为95.84%和93.78%，显著高于0.5%苦参碱水剂800倍液处理（PP>0.05）。亚致死剂量短稳杆菌（LC20）处理后，草地贪夜蛾幼虫体内谷胱甘肽S-转移酶、羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性均有不同程度下降。【结论】短稳杆菌对草地贪夜蛾低龄幼虫具有较好的室内杀虫活性和田间防治效，可作为防治草地贪夜蛾有效的生物农药使用。在玉米田草地贪夜蛾低龄幼虫盛发期，使用100亿孢子/mL短稳杆菌悬浮剂进行防治时，建议使用800~1000倍液喷施。

• 西双版纳勐海县不同生境蛛蜂群落结构及优势类群动态研究

  濮永胜, 陶玉, 王金秀, 赵苓, 李强, 马丽,

  【目的】探究不同生态环境下蛛蜂的群落结构及不同季节蛛蜂优势类群的个体数量变化，为蛛蜂与生态环境协同演化及传粉昆虫和天敌昆虫的保护利用研究提供参考。【方法】于2018年4月—2019年5月每月定时、定点在西双版纳勐海县贺开村采用马氏网结合黄盘诱集法系统调查农田区（样地Ⅰ）、农田与茶园交界区（样地Ⅱ）、茶园区（样地Ⅲ）和次生林区（样地Ⅳ）4种不同生境蛛蜂群落特征及优势物种种群动态。【结果】在西双版纳勐海县4种不同生境中共采集到蛛蜂标本801号，隶属于2亚科33属112种，其中农田生境的蛛蜂个体数量和物种数量最多；4种生境中共有的属有9个，Poecilopompilus、副湾蛛蜂属、铁色蛛蜂属、童蛛蜂属、盗蛛蜂属和隐唇沟蛛蜂属仅分布于农田生境，刺沟蛛蜂属仅分布于农田与茶园混合生境，狭鳞沟蛛蜂属仅分布于落叶阔叶林生境；奥沟蛛蜂属和扁腹沟蛛蜂属为优势类群，未采集到稀有类群。4个样地蛛蜂群落的Margalef丰富度指数排序为：样地Ⅰ（12.42）>样地Ⅲ（8.47）>样地Ⅱ（8.04）>样地Ⅳ（6.23）；Shannon-Wiener多样性指数排序为：样地Ⅰ（3.50）>样地Ⅲ（3.26）>样地Ⅱ（3.01）>样地Ⅳ（2.46）；Berger-Parker优势度指数排序为：样地Ⅳ（0.44）>样地Ⅱ（0.24）>样地Ⅰ（0.20）>样地Ⅲ（0.15）；Pielou均匀度指数排序为：样地Ⅲ（0.87）>样地Ⅰ（0.81）>样地Ⅱ（0.80）>样地Ⅳ（0.71）。不同生境蛛蜂群落不相似，一种生境与周围生境共有部分蛛蜂种类，且距离相对接近的农田区与茶园农田混合区、茶园区与次生林区中的蛛蜂群落结构相似性较高。2个优势类群奥沟蛛蜂属和扁腹沟蛛蜂属的个体数量在4个样地中均是干热季最多，湿热季和雾凉季数量相对较少；奥沟蛛蜂属在样地Ⅰ中个体数目雾凉季比湿热季多，其余样地的奥沟蛛蜂属和扁腹沟蛛蜂属个体数量的季节变化均是湿热季大于雾凉季。【结论】西双版纳勐海县蛛蜂属种丰富，但不同生境中蛛蜂的群落组成和特征存在差异。蛛蜂有较强的活动能力，在相邻的生境中共享了部分种类。蛛蜂优势类群个体数主要随季节的变化而变化，高温、低湿的季节更适于蛛蜂生存。

• 鱼腥草炭疽病病原鉴定及室内药剂筛选

  周洁, 吴金平, 王明安, 齐传东, 邓红军, 文生巧, 郭凤领,

  【目的】明确鱼腥草炭疽病病原菌种类，筛选出有效的防治药剂，为鱼腥草炭疽病大田防治提供参考。【方法】采用组织分离法对湖北省宜昌市当阳市两河镇鱼腥草炭疽病病原菌进行分离，基于柯赫氏法则进行病原菌致病性测定，并对病原菌的ITS、GAPDH、TUB2、ACT和CAL基因序列进行扩增，结合多基因序列分析和形态学特征对病原菌进行种类鉴定，利用菌丝生长速率法测定病原菌生物学特性和5种常用杀菌剂对病原菌的室内毒力。【结果】从病叶样本中共分离获得6株菌株，选取具有代表性的菌株YXC26进行形态特征和致病性测定。致病性测定结果显示菌株YXC26为鱼腥草炭疽病致病菌。结合菌株YXC26形态观察和多基因序列分析结果，确定菌株YXC26为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。菌株YXC26生物学特性测定结果显示，菌株YXC26菌丝生长的最适pH为6，最佳碳源为麦芽糖和葡萄糖，最佳氮源为酵母提取物和牛肉浸粉，菌丝致死温度为53℃处理10 min。5种供试杀菌剂中，50%多菌灵可湿性粉剂对菌株YXC26菌丝生长的抑制效果最好，其抑制中浓度（EC50）为0.04 mg/L；其次为25%吡唑醚菌酯悬浮剂，其EC50为0.14 mg/L；62%嘧环&#183;咯菌腈水分散粒剂的EC50为1.16 mg/L，抑制效果也较好；30%甲霜噁霉灵水剂和250 g/L嘧菌酯悬浮剂的EC50均超过30.00 mg/L，抑制效果较差。【结论】湖北省宜昌市当阳市两河镇鱼腥草炭疽病病原菌为胶孢炭疽菌。50%多菌灵可湿性粉剂、25%吡唑醚菌酯悬浮剂和62%嘧环&#183;咯菌腈水分散粒剂对鱼腥草炭疽病菌菌丝生长均有较好的抑制作用，可作为鱼腥草炭疽病田间防治的候选药剂。

• 深色有隔内生真菌Ochroconis guangxiensis X22诱导子对香蕉的促生和抗枯萎病效果

  邱美莎, 张艳, 曾凤花, 林珊宇, 龙艳艳, 孙正祥, 谢玲,

  【目的】从深色有隔内生真菌Ochroconis guangxiensis X22中提取和筛选对香蕉具有促生和抗枯萎病作用的诱导子，为香蕉枯萎病的诱抗剂开发打下理论基础。【方法】通过组培苗接种，评价菌株X22对香蕉枯萎病的室内防治效果；采用匀浆、热解和浸提等方法从菌株X22菌丝体中提取多糖、寡聚糖和激活蛋白3种物质，通过水培试验评价3种提取物对香蕉苗生长和生长激素含量的影响，测定3种提取物对香蕉枯萎病的防治效果及其对香蕉苗抗病防御酶活的影响。【结果】在无菌条件下菌株X22处理香蕉组培苗后再接种病原菌Foc4，枯萎病发生较轻，叶片颜色正常且植株相对健康粗壮，其防治效果为58.9%；多糖、寡聚糖和激活蛋白3种提取物处理香蕉苗后，多糖处理的香蕉苗株高、根长及鲜重与对照相比分别显著增加16.9%、57.8%和3.9%（P3含量显著提高39.6%、11.8%；寡聚糖处理的香蕉苗对枯萎病防治效果最明显，对地上部分和地下球茎的防效分别为46.24%和54.73%；多糖处理香蕉苗后20 d再接种Foc4，香蕉叶片的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（PPO）含量在9 d内显著高于对照。【结论】菌株X22及其多糖和寡聚糖提取物对香蕉苗具有促生与抗病作用，可作为研制香蕉抗病诱抗剂的重要资源。

• 5个桃砧木品种对淹水胁迫的生理响应及耐涝性评价

  朱炜, 龚林忠, 王富荣, 王会良, 刘勇, 艾小艳, 张杨, 郎鹏, 史文琦, 何华平,

  【目的】探究不同品种桃树砧木对淹水胁迫的生理响应及耐涝性，为桃耐涝砧木品种选育及抗涝机理提供理论依据。【方法】以毛桃、抗砧1号、浙砧1号、筑波6号、南京白沙5个桃砧木当年生实生苗为供试材料，设正常水分（对照，CK）和淹水处理，测定叶片的光合特性、抗氧化酶活性、光合色素及渗透调节物质含量等指标，综合评价砧木耐涝性。【结果】淹水处理下，各砧木叶片的净光合作用（Pn）和蒸腾速率（Tr）均显著低于CK（PGs）较CK显著降低；浙砧1号的胞间二氧化碳浓度（Ci）较CK显著下降，其他品种不同程度上升。筑波6号、抗砧1号、南京白沙和毛桃的叶绿素a（Chl a）和类胡萝卜素（Car）含量较CK显著下降。浙砧1号的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、脯氨酶（Pro）和可溶性蛋白（SP）含量较CK显著提高，丙二酶（MDA）含量显著低于CK；毛桃的过氧化物酶（POD）、CAT及Pro活性显著提高，而SOD活性和（SP）含量显著下降。各种砧木的POD、CAT和Pro的耐涝系数均大于100.00%，Pn、Tr、Chl a、Chl b和Car的耐涝系数均小于100.00%。利用主成分及隶属函数等多元统计方法对15个指标耐涝系数进行综合分析，浙砧1号综合耐涝评价值D值最大，为0.760，表现出较强的耐涝性，其次为南京白沙、筑波6号和抗砧1号，耐涝性中等，毛桃D值最小，为0.091，耐涝性最弱。【结论】淹水胁迫不同程度抑制了砧木叶片光合作用和光合色素合成，各砧木在胁迫下调节体内渗透物质和抗氧化酶能力不同，耐涝性存在差异。在涝害频发的区域应避免桃园积水并采用耐涝性较好的砧木品种。

• 马尾藻复合菌发酵液的制备及其对橡胶苗抗寒性的影响

  袁佳娜, 刘海林, 林清火, 茶正早, 郭澎涛, 黄艳艳, 杨红竹, 罗微,

  【目的】利用复合菌剂液态发酵制备马尾藻发酵液，探究马尾藻发酵液在橡胶幼苗上的应用及对其抗寒性的提升作用。【方法】以芽孢杆菌、里氏木霉和黑曲霉为发酵菌剂对马尾藻进行单一菌种和复合菌剂液态发酵，以复合菌发酵液开展橡胶幼苗低温胁迫试验，温度设置为15℃，分别设5种不同用量（不施用发酵液，发酵液稀释200、400、600和800倍），与30℃条件下生长的橡胶幼苗进行对比，测定马尾藻发酵液的pH、海藻酸含量、多糖提取率及橡胶幼苗的生物量、根系活力、丙二醛（MDA）、可溶性蛋白（SP）和抗氧化酶含量。【结果】马尾藻复合菌剂发酵过程中，所有处理的pH均呈先降后升的趋势，复合菌剂处理海藻酸含量略高于单一菌种。在多糖提取率方面，复合菌剂处理显著高于单一菌种，芽孢杆菌和里氏木霉二者协同处理提取率最高，为14.08%。在低温胁迫试验中，橡胶幼苗生物量均有所下降，施用马尾藻发酵液的橡胶幼苗根系活力提高，其中马尾藻发酵液稀释600倍的处理根系活力最大，为0.051 mg/（g&#183;h）。受到低温胁迫橡胶幼苗体内的MDA含量和SP含量均有所增加，马尾藻稀释600倍处理的MDA含量增加幅度最小，SP含量提高22%。低温条件下，除马尾藻发酵液稀释200倍处理外其余处理的POD活性均有所下降，液稀释600倍处理的SOD活性在3种抗氧化酶中最高，稀释400倍处理CAT酶活性最高。【结论】复合菌剂降解效果显著优于单一菌剂，芽孢杆菌和里氏木霉菌协同发酵马尾藻效果最优，将马尾藻发酵液稀释600倍之后可有效缓解低温对橡胶幼苗的损伤作用，提高幼苗的抗逆性。

• 低温驯化对菊花品种抗寒性的影响

  王珂, 李继东,

  【目的】明确低温驯化的对于菊花耐冷性的积极作用，以期为菊花耐低温的深入研究和菊花抗寒品质的进一步挖掘提供理论参考。【方法】以姹紫嫣红和金龙腾云2个菊花品种为试验材料，分别设低温处理（-4℃下24 h）和低温驯化（先4℃下24 h即低温驯化过程，然后-4℃处理24 h），以常温（25℃）为对照，测定并分析叶片中叶绿素含量、抗氧化酶活性、相对电导率（REC）、丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）及活性氧等生理指标变化，分析各生理指标的相关性，并运用隶属函数法进行2个菊花品种的耐低冷性综合评价。【结果】低温驯化和低温处理后，2个菊花品种叶片的叶绿素含量和抗氧化酶活性均表现出逐渐降低的趋势；而叶片的REC及MDA和Pro含量则表现出逐渐上升的趋势。经过低温驯化的2个品种叶片中的过氧化物酶（POD）活性、REC及MDA、Pro、过氧化氢（H2O2）和超氧阴离子（O-2）含量均显著低于低温处理（P-2含量表现明显，MDA和H2O2含量则在姹紫嫣红品种上表现明显；叶绿素含量和POD活性则显著高于低温处理；在金龙腾云品种上叶绿素a、叶绿素b含量及POD活性分别比低温处理提高38%、54%和18%，类胡萝卜素含量在姹紫嫣红品种中比低温处理增长一倍。相关分析显示，金龙腾云的耐冷性大于姹紫嫣红。在未经低温驯化条件下，金龙腾云的耐冷性表现优于低温驯化；而姹紫嫣红的耐冷性表现劣于低温驯化。【结论】低温驯化后，2个菊花品种生理特性均优于低温处理，金龙腾云比姹紫嫣红更耐冷，低温驯化对菊花叶片的机械损伤能起到一定的保护作用，降低了菊花细胞质膜受伤害的程度，进而提高菊花对低温的抵御能力。

• 碳氮比对芒果树剪枝堆肥的影响

  董丽艳, 朱军保, 虎海波,

  【目的】探讨初始物料不同碳氮比（C/N）芒果树修剪枝在堆肥过程中腐殖化程度的影响，为芒果园清洁生产及废弃物资源化利用提供参考依据。【方法】于四川攀枝花仁和区芒果产业园基地，以修剪下来的含高C/N和难生物降解木质纤维素的芒果树枝树叶为原料，设T20（C/N=20）、T25（C/N=25）和T30（C/N=为30）处理，以C/N=63.63为对照（CK），测定堆肥理化性质的动态变化。【结果】各处理堆肥理化性质的各项指标并未随着物料C/N的增加而呈线性变化。堆肥的pH和电导率（EC）均在堆肥腐熟标准的正常范围内，CK的pH整体低于其他3个处理，T25处理的EC整体低于其余3个处理。纤维素降解率分别为7.54%、32.21%、12.87%和8.75%。胡敏酸含量整体呈降低趋势，富里酸含量整体变化规律为降低、升高再降低。T20和T25处理的高温期持续时间（5和8 d）和种子发芽指数指标（GI）（0.89和0.93）均达堆肥腐熟要求。从终点C/N与初始C/N的比值（T值）和腐殖化指数2个指标来看，仅T25处理达腐熟要求，T30处理和CK的高温期持续时间均为4 d，T值为0.84和0.73，均不满足T≤0.60的腐熟标准。GI为0.75和0.76，未达到GI>0.85的腐熟要求；腐殖化指数分别为0.85和1.25，T30处理并不满足腐殖化指数不低于1.00的腐熟标准。【结论】当初始物料C/N=25时，对有机质和纤维素降解、堆体高温累积、种子GI增加有促进作用，可缩短堆肥周期，堆肥综合效果最佳。

• 砧木和覆膜对爱媛28果实营养品质的影响

  王敏, 杨蕾, 洪林, 王武, 杨海健, 周心智, 张云贵, 汪卉,

  【目的】探索砧木和覆膜对爱媛28果实内在品质及营养功能成分的影响，以期为进一步优化其栽培技术提供参考。【方法】分别以枳和卡里佐枳橙为砧木，设置4个处理，即枳+不覆膜、枳+覆膜、卡里佐枳橙+不覆膜、卡里佐枳橙+覆膜，测定不同处理的果实基础品质及糖、有机酸、类黄酮、酚酸、氨基酸和异味物质含量。【结果】不覆膜条件下，相比卡里佐枳橙砧，枳砧果实的可溶性固形物、可滴定酸含量和维生素C含量分别高9.78%、8.20%和4.84%，总糖含量、有机酸总量和总类黄酮含量显著高于卡里佐枳橙（P<0.05，下同），分别比卡里佐枳橙砧果实高18.65%、27.93%和10.64%；但总酚含量和总氨基酸含量显著低于卡里佐枳橙砧；同时，枳砧爱媛28果实的异味物质乙醇和乙醛含量显著低于卡里佐枳橙砧果实。相比不覆膜，覆膜处理下，爱媛28果实中可溶性固形物含量、有机酸总量和总酚含量均显著增加，其中枳砧果实的上述3个指标分别增加9.90%、5.20%和66.12%，卡里佐枳橙砧分别增加9.78%、5.64%和28.88%。覆膜处理下，2种砧木处理的果实中异味物质乙醛和乙醇含量均显著降低，其中，枳砧分别减少15.58%和9.01%，卡里佐枳橙砧分别减少37.17%和11.76%；此外，枳砧果实的总氨基酸含量显著增加，卡里佐枳橙砧果实的总氨基酸含量显著减少。【结论】生产上爱媛28以枳作为砧木，其果实的综合品质明显优于卡里佐枳橙砧，且通过覆膜可进一步改良爱媛28的果实营养品质，提升风味。

• 狭叶润楠和山胡椒的老鹰红茶品质分析

  谢伦, 彭娟, 白雪, 杨永仪, 熊彪,

  【目的】对狭叶润楠和山胡椒鲜叶制作的老鹰红茶品质进行分析，为贵州当地老鹰茶产业的发展提供理论依据。【方法】以狭叶润楠和山胡椒的鲜叶为试材，参照传统红茶工艺制作老鹰红茶，对2种老鹰红茶进行感官审评、生化成分含量测定及其相关分析，并通过气相色谱—质谱联用仪检测其挥发性物质。【结果】山胡椒老鹰红茶外形卷曲、香气持久高扬、滋味醇和，综合得分为90.08分；狭叶润楠老鹰红茶外形细紧、香气持久、滋味鲜爽甜醇，综合得分为89.84分。山胡椒老鹰红茶的多酚类物质、蛋白质和茶黄素含量分别较狭叶润楠老鹰红茶显著提高62.3%、37.5%和11.1%（P<0.05，下同），而狭叶润楠老鹰红茶的总黄酮含量较山胡椒老鹰红茶显著提高29.3%。2种老鹰红茶均检测出17种氨基酸组分，其中山胡椒老鹰红茶的氨基酸组分总含量较狭叶润楠老鹰红茶提高5.4%，天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和亮氨酸是2种老鹰红茶中含量较高的组分。山胡椒老鹰红茶的水浸出物与茶红素呈显著正相关，与总黄酮、可溶性糖、蛋白质和粗脂肪呈显著负相关；狭叶润楠老鹰红茶的水浸出物与蛋白质呈显著正相关，与总黄酮、茶黄素、粗脂肪和灰分呈负相关。山胡椒老鹰红茶共检测出15种挥发性物质，包括8种萜烯烃类、2种醇类、1种醛类、2种酯类和2种其他类化合物；狭叶润楠老鹰红茶共检测出14种挥发性物质，包括5种萜烯烃类、1种醇类、4种醛类、1种酯类和3种其他类化合物；2种老鹰红茶中含量最高的挥发性物质均为萜烯烃类化合物。【结论】通过感官审评结果、生化成分和挥发性物质的测定，山胡椒和狭叶润楠的鲜叶均适合制作老鹰红茶，其品质均表现良好，各具特点。

• 不同茶类寡肽含量的测定和分析

  刘慧, 王小娟, 王弛, 刘华丰, 翁秋生, 叶乃兴, 谢勇, 赵峰,

  【目的】构建适于普通理化实验室操作的茶叶寡肽定量方法，为茶叶寡肽研究提供技术支持。【方法】以六大茶类的30份样品为试材，考察溶剂浓度、提取温度和提取时间对茶叶中寡肽含量的影响；利用三氯乙酸沉淀提取液中的大分子量蛋白质后，采用甲醛滴定法和凯氏定氮法分别测定提取液中游离氨基酸含量及游离氨基酸和寡肽总量，计算二者差值即为寡肽含量；同时利用建立的寡肽定量方法，分析不同茶类寡肽含量的差异。【结果】提取溶剂对茶叶寡肽含量有显著影响（PP>0.05）。优化的提取条件为：使用50%乙醇，80℃下加热回流提取30 min；该方法的稳定性较好（重复试验相对标准偏差白茶>黑茶>绿茶>红茶>乌龙茶，其中，黄茶和白茶的含量为3.88%~6.00%，黑茶和绿茶的含量为2.45%~6.53%，红茶的含量为1.90%~4.84%，乌龙茶的含量为0.70%~3.93%。【结论】通过优化提取方法，并将凯氏定氮法与甲醛滴定法结合，较好地实现茶叶寡肽的定量测定；同时发现茶类的加工工艺及原料嫩度可能对茶叶寡肽含量有影响。