南方农业学报杂志

南方农业学报杂志2021年第8期

• 2013—2019年我国流行性出血病病毒血清1型毒株的分离与遗传特征分析

  李卓然, 吴健敏, 朱建波, 王金萍, 吕敏娜, 肖雷, 杨振兴, 廖德芳, 李华春, 杨恒,

  【目的】掌握流行性出血病病毒（Epizootic haemorrhagic disease virus，EHDV）血清1型毒株（EHDV-1）在我国南方地区的流行情况及其遗传特征，为开展EHDV-1血清型特异性诊断、流行病学调查和致病性研究提供科学依据。【方法】2013—2019年通过在我国云南、广东和广西设立牛羊虫媒病毒监控点和哨兵牛，定期采集哨兵牛血液样本进行虫媒病毒分离；通过微量中和试验确定EHDV分离株的血清型，然后对EHDV分离株的部分基因节段（Seg-2、Seg-3和Seg-6）进行RT-PCR扩增、双向测序及序列分析，并利用BioEdit计算EHDV基因组各节段核苷酸序列及其推导氨基酸序列的相似性。【结果】2013—2019年从云南、广东及广西的虫媒病毒监控点共分离获得33株EHDV，其中7株为EHDV-1型毒株。分离获得的7株EHDV-1型毒株Seg-2、Seg-3和Seg-6核苷酸序列高度同源，其平均相似性分别为（97.65±1.51）%、（94.87±4.72）%和（97.61±1.41）%，对应的推导氨基酸序列相似性平均为（97.69±1.36）%、（99.49±0.32）%和（97.51±2.47）%。基于Seg-2、Seg-3和Seg-6核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示，不同EHDV-1型毒株可划分为东方（Eastern）和西方（Western）2种地域型，东方地域型毒株分离自中国、日本及澳大利亚，西方地域型毒株主要来源于美洲和非洲。在基于Seg-2核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中，分离获得的7株EHDV-1型毒株归属于西方地域型，且聚类形成一个相对独立的进化分支；在基于Seg-3核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中，分离获得的7株EHDV-1型毒株分属2种地域亚型（Eastern-1和Eastern-2），分别与日本EHDV-1型和EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系；在基于Seg-6核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中，分离获得的7株EHDV-1型毒株属于东方地域型，与日本EHDV-1型毒株具有较近的亲缘关系。【结论】EHDV-1型毒株已在我国南方地区广泛流行，其Seg-2和Seg-6序列分别具有最近的共有祖先病毒，而Seg-3序列来自不同的祖先病毒。西方地域型毒株Seg-2序列在我国流行EHDV-1型毒株中的出现，说明西方地域型毒株在侵入我国后可能与本土流行的毒株发生重配，即我国流行EHDV-1型毒株为西方地域型与东方地域型的重配型毒株，为防范强致病性西方地域型毒株传入我国而造成畜牧业重大经济损失提供了警示。

• 黄独赤霉素受体基因DbGID1s克隆及生物信息学分析

  唐文芳, 徐升胜, 龙雯虹,

  【目的】克隆黄独赤霉素受体（GID1）基因DbGID1s，并对其进行生物学信息分析，为深入探究DbGID1s蛋白在黄独生长发育中的作用机制提供理论参考。【方法】采用RT-PCR技术克隆DbGID1s基因，利用生物信息学软件对其理化性质、结构域、磷酸化位点及系统发育进化进行预测分析。【结果】克隆获得4个DbGID1s基因序列，命名为DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C，GenBank登录号为MT648372、MT648374、MT648375和MT648373，长度分别为862、1273、1081和1164 bp，编码292、340、289和360个氨基酸残基。4个DbGID1s蛋白的分子量为32079.17~40301.83 Da，理论等电点（pI）为6.05~8.62，为不稳定的外在膜亲水性蛋白，不存在信号肽序列，其磷酸化位点主要以丝氨酸（Ser，S）为主，且4个蛋白的磷酸位点均有重合位点和突变位点，不仅具有α/β折叠水解酶超级家族羧酸脂肪酶水解活性区域，还具有激素脂肪酶（HSL）的保守结构域（HGG和GXSXG）和催化联合位点（S、D和H）。DbGID1s蛋白与其他植物GID1蛋白序列具有较高的氨基酸序列相似性，其中与山药的相似性达90%以上。【结论】DbGID1s基因具有多种植物GID1基因的基本特征，其编码的蛋白具有GID1蛋白典型的结构域，其可能参与赤霉素（GA）信号转导，调节黄独的生长发育。

• 怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因克隆和表达分析

  洪森荣, 陈正梦, 戴慧珍, 邓曼蕾,

  【目的】对怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因进行克隆和表达分析，为进一步揭示怀玉山三叶青黄酮醇合酶的生物学功能奠定基础。【方法】怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因的核心片段通过其转录组数据库进行筛选，怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因利用逆转录PCR进行克隆，序列分析采用生物信息学进行分析，器官表达采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）进行比较。【结果】怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因cDNA总长度为987 bp，G+C含量为47.92%。怀玉山三叶青黄酮醇合酶由329个氨基酸组成，分子量37578.03 Da，理论等电点5.39，为亲水性蛋白；其二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲的比例分别占27.66%、21.88%和50.46%。怀玉山三叶青黄酮醇合酶主要存在内质网中，在进化上与山甜菜（Nekemias grossedentata）、河岸葡萄（Vitis riparia）和葡萄（Vitis vinifera）的亲缘关系较近，尤其是与山甜菜（N.grossedentata）黄酮醇合酶在进化上具有最高的亲缘关系。qRT-PCR分析结果表明，怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因的表达在2个栽培种中存在器官特异性表达，怀玉2号在根中的相对表达量最高，怀玉1号在茎中的相对表达量最高。【结论】怀玉山三叶青黄酮醇合酶具有典型黄酮醇合酶的结构特征，氨基酸序列及核酸序列与同源物种相似度高，在进化上高度保守，且怀玉山三叶青黄酮醇合酶基因的表达存在组织器官差异性。

• 云南省野生半夏资源调查及种质评价

  寸竹, 董益, 张广辉, 陈军文,

  【目的】调查野生半夏［Pinellia ternata（Thunb.）Berit.］在云南省的分布状况，并对采集区的野生半夏资源进行评价，为半夏优良品种的选育及野生半夏的保护和可持续利用提供理论基础。【方法】采取文献查阅、实地走访和样方调查相结合的方法对云南省野生半夏资源分布及生境条件进行详细考证，同时测定分析不同采集地的野生半夏农艺性状和鸟苷含量，并进行综合评价。【结果】云南省野生半夏分布在滇东北地区和滇东南地区的大关、马关、丘北、建水、砚山、师宗、宣威、开远、寻甸、鲁甸和会泽等11个县（市）。半夏生长于山野林下草地和栽培地的田间地头（以杂草式生长），常见于草坡、荒地、玉米地、烟草地、石缝处、田边或疏林下，其中，多数分布于玉米地或烟草地。野生半夏资源分布于814~2096 m的海拔范围内，但集中分布于1562~2096 m海拔范围内；采集区内年平均气温为12.0~19.9℃，年降水量为815.0~1600.0 mm，但主要集中于降水量大于900.0 mm的地区。野生半夏叶柄长15.2~27.1 cm，以宣威、寻甸、丘北和师宗等县较长；中裂片长为5.4~11.9 cm，以师宗、寻甸和马关等县的半夏中裂片长较长；中裂片宽为2.4~4.3 cm，各县的中裂片宽均无显著差异（P>0.05，下同）；块茎重为1.0~2.5 g，以大关、马关、砚山和师宗等县的半夏块茎较重；叶片数为2.4~2.9，以会泽县的半夏叶片数最少；株芽数为0.9~1.7，以师宗县半夏株芽数最多；块茎直径为10.7~16.5 mm，以砚山县和师宗县的半夏较大。不同采集地的半夏鸟苷含量为0.00420%~0.04250%，以寻甸、师宗和宣威等县（市）的野生半夏鸟苷含量较高，以鲁甸县和丘北县的野生半夏鸟苷含量较低。【结论】云南省野生半夏喜温暖、湿润和荫蔽的生态环境，主要分布在云南省滇东北和滇东南片区，生境条件为海拔1500~2100 m，降水量高于900.0 mm，年平均气温为15.0℃左右。师宗县和砚山县及其周边类似生态区适宜野生半夏的生长和有效成分鸟苷的积累。

• 广西产罗汉松叶指纹图谱研究

  陈明伟, 韦锦梅, 甄丹丹, 丘琴, 卢显兴, 黄秋艳, 甄汉深,

  【目的】以广西产罗汉松［Podocarpus macrophyllus（Thunb.）D.Don］的叶为研究对象，建立高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，为罗汉松叶的质量评价提供参考依据。【方法】利用HPLC对广西产罗汉松叶进行指纹图谱研究，建立共有模式，并进行方法学考察，使用相似度评价系统对10批不同产地罗汉松叶的共有峰进行确认，对其相似度进行评价；使用SPSS 21.0，以共有峰原始峰面积数据进行聚类分析。【结果】方法学考察结果中，精密度试验主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差（RSD）均小于3%；稳定性试验相对峰面积的RSD均小于3%，表明样品提取液在24 h内较稳定；重复性试验所有色谱峰的相对保留时间的RSD均小于2%；建立罗汉松叶的指纹图谱，10批不同产地罗汉松叶初步建立其共有模式，标定了22个共有峰，样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度都在0.900以上，相似性良好。在10批罗汉松叶药材的指纹图谱中，共有峰的相对保留时间无明显差异。10批罗汉松叶样品可分为3类：S4为第1类；S3、S2和S1为第2类；S5、S6、S7、S8、S9和S10为第3类。【结论】建立的罗汉松叶指纹图谱特征性强，准确可靠，可为罗汉松叶的质量评价提供参考依据。

• 灯盏花不同部位水浸提液对4种作物的化感效应分析

  王田涛, 关德军, 杨梅, 钟汝艳, 卢丙越, 孟衡玲,

  【目的】从化感作用角度筛选适宜与灯盏花进行间套轮作的农作物，为解决灯盏花连作障碍，建立合理的灯盏花间套轮作体系提供参考依据。【方法】采用水提法制备灯盏花根、茎、叶浸提液，每种浸提液设3个浓度梯度（0.05、0.10和0.15 g/mL），以蒸馏水为对照，研究灯盏花不同部位浸提液对辣椒（Capsicum annuum）、玉米（Zea mays）、水稻（Oryza sativa）和青菜（Brassica chinensis）的化感效应。【结果】灯盏花根、茎、叶浸提液对辣椒、玉米、水稻种子萌发和幼苗生长均有不同程度的抑制效应，综合化感效应强度随着水浸液浓度的增加而增强。灯盏花叶浸提液对辣椒种子发芽指数呈低促高抑的双重效应。0.15 g/mL根浸提液处理下，辣椒、玉米、水稻和青菜的幼苗根长分别较对照显著下降75.78%、77.79%、82.24%和69.75%（P水稻>玉米>青菜。灯盏花各部位水浸液对4种作物的化感作用强弱整体表现为地上部>地下部。【结论】青菜和玉米较适宜进入灯盏花轮作体系中，以缓解灯盏花连作障碍，该结论与实际种植情况相符。

• 杉树林下土壤酚类物质对三七的化感作用

  张义杰, 陆仁窗, 李天尧, 叶辰, 范黎明, 杨敏, 黄惠川, 刘屹湘, 何霞红, 朱书生,

  【目的】明确杉树林下三七根系生长不良的原因，为林下三七种植过程中土壤的选择提供理论依据。【方法】以杉树林下三七生长正常区域的土壤为对照，测定生长不正常区域的土壤的电导率、pH和酚类化感物质及三七根系生长指标（须根数量、主根长度、鲜重和干重）；采用滤纸片法，研究不同浓度酚类物质（1、5、10、15、20和30 mg/L）对三七根系活力和相对电导率的影响，以及对生菜根系生长的抑制作用。【结果】三七生长不正常区域的土壤显著降低三七的须根数量、主根长度和根系的鲜重与干重（PP<0.01，下同）正相关，与土壤电导率呈显著或极显著负相关；土壤中对羟基苯甲酸和香草酸含量与三七的鲜重和干重呈显著负相关。相比CK，当丁香酸、阿魏酸、香草酸及混配的浓度介于5~30 mg/L时，根系活力显著降低，当香草醛、丁香酸和阿魏酸的浓度达15 mg/L时，根系溶液的相对电导率显著升高。【结论】杉树林下土壤pH的降低和酚类化感物质的累积会对三七生长产生不利影响。

• 不同种源滇重楼对干旱胁迫的响应分析

  王元忠, 沈涛, 张金渝,

  【目的】筛选滇重楼（Paris polyphylla var.yunnanensis）抗旱种源，为滇重楼抗旱种源筛选及种质遗传改良提供理论依据。【方法】以3个种源（温带种源、南亚热带种源和北热带种源）的滇重楼为试验材料，结合单因素方差分析、相关分析、正交偏最小二乘判别分析及变量投影重要性分析，对比分析充足水分（W0）、轻度干旱（W1）和重度干旱（W2）3个水分梯度下，不同种源滇重楼根茎叶性状、生物量分配及总皂苷产量等性状的变异，并对抗旱种源进行评价。【结果】单因素方差分析结果显示，土壤水分显著影响滇重楼地上、地下多个性状（P0：6.16&#177;2.78 g、W1：4.78&#177;1.51 g和W2：2.98&#177;0.59 g）及总皂苷产量（W0：60.51&#177;28.23 mg、W1：45.96&#177;16.88 mg和W2：13.62&#177;2.51 mg）最高；相关分析结果显示，株高、茎粗、茎鲜重、茎生物量、叶鲜重、叶生物量、叶长和叶宽与滇重楼根及根茎部位的鲜重、生物量及总皂苷含量呈极显著（P1处理的植株根茎直径、根茎长、须根直径、须根长、须根数、茎鲜重、茎生物量、叶鲜重、叶生物量、叶片含水率、株高、茎粗、叶长和叶宽明显高于W2处理；变量投影重要性分析结果显示，不同种源的株高、叶长、叶宽、茎鲜重、须根长、须根数的VIP值>1.0，表明上述性状对干旱胁迫较敏感。【结论】综合分析地下器官生物量和总皂苷产量，南亚热带滇重楼抗旱性最佳；其高产优质性状在未来抗旱优良种源培育中应加以关注。

• 茅苍术林下种植模式对土壤养分及其根茎品质的影响

  张莉, 张艳玲, 刘红云, 刘合满, 徐运飞, 尹健, 熊念兵,

  【目的】筛选适宜于茅苍术生长的林药种植模式，为茅苍术林下优质高产栽培提供理论依据。【方法】以1年生茅苍术为材料，研究茅苍术单作、茅苍术||栀子和茅苍术||罗汉松3种种植模式对土壤养分含量、茅苍术单株根茎产量及根茎中挥发油和苍术素含量的影响。【结果】与单作相比，茅苍术||栀子、茅苍术||罗汉松处理显著降低0~20 cm和20~40 cm土层土壤有机质和有效磷含量（P<0.05，下同）；茅苍术||栀子处理不同土层的土壤碱解氮和速效钾含量均显著高于单作，茅苍术||罗汉松处理的碱解氮含量显著低于单作。在根茎产量和品质方面，与单作相比，茅苍术||栀子和茅苍术||罗汉松处理显著提高茅苍术单株根茎干重41.75%和205.17%，且茅苍术||罗汉松处理根茎挥发油和苍术素含量显著高于茅苍术||栀子处理221.83%和33.69%。【结论】相对于茅苍术单作，茅苍术与罗汉松复合种植可降低土壤养分含量，形成一定程度的营养胁迫逆境效应，有利于茅苍术根茎增产提质，是一种较适宜的林药种植模式。

• 太子参叶斑病病原鉴定及室内药剂筛选

  何洁, 梁霜, 张国俊, 赵致, 李忠,

  【目的】明确贵州省施秉县太子参叶斑病的病原种类，并探究6种杀菌剂对病原菌的室内抑制活性，以期为太子参叶斑病田间药剂防治提供参考。【方法】利用组织分离法对具有典型叶斑病症状的太子参病叶进行病原菌分离纯化，依据柯赫氏法则进行验证，结合形态学观察及多基因（ITS、tef1、LSU、SSU、GAPDH和rpb2）系统发育分析对病原菌进行鉴定；采用菌丝生长速率法测定6种常见杀菌剂（35%氟菌&#183;戊唑醇悬浮剂、43%氟菌&#183;肟菌酯悬浮剂、75%肟菌&#183;戊唑醇水分散粒剂、60%唑醚代森联水分散粒剂、37%苯醚甲环唑水分散粒剂和30%苯甲丙环唑乳油）对病原菌的室内毒力。【结果】引起贵州省施秉县太子参叶斑病的病原菌为细极链格孢（Alteraria tenuissima），菌株编号为TZSYB1。室内毒力测定结果表明，供试6种杀菌剂对菌株TZSYB1菌丝生长均有一定的抑制作用，其中30%苯甲丙环唑乳油的抑制活性最强，对病原菌的抑制中浓度（EC50）为10.81 μg/mL；其次为37%苯醚甲环唑水分散粒和43%氟菌&#183;肟菌酯悬浮剂，EC50分别为21.31和27.31 μg/mL。【结论】引起贵州省施秉县太子参叶斑病的病原菌为细极链格孢，可选用30%苯甲丙环唑乳油、37%苯醚甲环唑水分散粒剂和43%氟菌&#183;肟菌酯悬浮剂进一步开展田间防治试验。

• 津岛链霉菌JT-2F对三七根腐病菌的抑制作用

  宋利沙, 蒋妮, 张占江, 陈乾平, 冯世鑫,

  【目的】明确津岛链霉菌JT-2F对三七根腐病菌的抑制作用，为三七根腐病的生物防治提供理论依据。【方法】采用平板拮抗和滤纸条法测定津岛链霉菌（Streptomyces tsukiyonensis）菌株JT-2F对三七根腐病菌和3种三七叶部病害病原菌的的抑制作用，并采用离体块根刺伤接种法测定菌株JT-2F对三七根腐病菌的防治效果；利用酶联免疫分析（ELISA）法测定菌株JT-2F发酵液中蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶等酶活性。【结果】菌株JT-2F对三七根腐病菌具有较强的拮抗作用，其抑菌率达76.47%，对3种三七叶部病害病原菌也有明显的抑制效果，抑菌率均超过80.00%。菌株JT-2F的发酵液对病原菌菌丝有明显的抑制作用，使菌丝体畸形、膨大变粗，并呈串珠形状。产酶能力测定结果显示，菌株JT-2F可分泌几丁质酶、蛋白酶和纤维素酶，可破坏病原菌菌丝体，并抑制病原菌生长。离体防效试验结果显示，菌株JT-2F发酵原液对离体三七块根根腐病的防效达78.43%。【结论】津岛链霉菌菌株JT-2F对三七根腐病菌有较好的抑制作用，具有较好的生防开发潜力。

• 贵州山豆根根腐病病原菌鉴定

  唐小迪, 魏升华, 秦睿, 崔文艳, 何朋杰,

  【目的】明确贵州山豆根根腐病的病原菌种类，为山豆根根腐病的防治及抗病育种提供理论基础。【方法】采用保湿培养法和组织分离法对感染根腐病的山豆根植株组织进行病原菌分离和纯化，根据柯赫氏法则对代表性菌株进行致病力测定；结合形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。【结果】从收集的病株组织样本中共分离获得200株真菌菌株，选取在PDA培养基上菌落形态差异明显的67株菌株进行ITS测序并在NCBI数据库进行BLASTn比对分析，结果显示，67株菌株中包含尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）35株、茄腐镰刀菌（F.solani）7株、粉红粘帚霉（Clonostachys rosea）23株和帚状弯孢聚壳（Eutypella scoparia）2株。致病性测定结果表明，尖孢镰刀菌代表性菌株和茄腐镰刀菌代表性菌株均可侵染山豆根引起典型的根腐病症状，且茄腐镰刀菌致病性明显强于尖孢镰刀菌。结合形态学特征和分子生物学鉴定结果，确认分离得到的病原菌分别为尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌。【结论】贵州山豆根根腐病主要由尖孢镰刀菌和茄腐镰刀菌复合侵染引起。

• 抗金银花白粉病菌贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株培养基及发酵条件优化

  黎燕珊, 崔文艳, 张陈芳, 黄小欣, 何朋杰,

  【目的】优化抗金银花白粉病菌贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株的发酵培养基及发酵条件，为其快速大量生产及进行大田生物防治提供理论依据。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌HC-8菌株为材料，采用单因素试验和正交试验，分别优化其发酵培养基及发酵条件；结合分生孢子萌发和平板对峙试验，分析优化方案下HC-8菌株对白粉病菌分生孢子萌发的抑制效果及对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的拮抗活性。【结果】HC-8菌株最适基础培养基为酵母蛋白胨培养基（YSP）；最佳培养基配方为蛋白胨5.0 g/L、酵母膏25.0 g/L、麦芽糖10.0 g/L；最佳发酵条件为温度37℃、初始pH 6.0、转速180 r/min、接种量0.100%、装液量20 mL/300 mL、培养时间48 h。优化方案下，HC-8菌株对白粉病菌分生孢子萌发的抑制率为83.15%，显著高于优化前的74.65%（P<0.05，下同）；对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的抑菌率分别为60.66%、59.03%和65.32%，显著高于优化前的54.31%、55.24%和59.17%。【结论】优化后的方案可提高HC-8菌株的发酵产量，并增强对尖孢镰刀菌、烟草疫霉和轮状镰刀菌的拮抗效果及对白粉病菌分生孢子萌发的抑制效果。建立的方案可用于快速、大批量发酵HC-8菌悬液。

• 玉木耳漆酶基因Aclac的克隆及原核表达

  苏文英, 谭一罗, 刘晓梅, 杨和川, 秦裕营, 李晓, 任立凯,

  【目的】对玉木耳漆酶基因Aclac进行克隆及原核表达分析，为深入研究漆酶基因在玉木耳子实体发育中的生物学功能提供理论依据。【方法】克隆Aclac基因的cDNA和DNA全长序列，对其进行生物信息学分析，并将目的基因连接至pET-28a质粒上以构建原核表达载体pET28a-Aclac，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。【结果】克隆获得的Aclac基因cDNA序列长度为1734 bp，编码577个氨基酸残基；Aclac基因DNA序列长度为2521 bp，含14个内含子。AcLAC蛋白理论分子量为64.75 kD，理论等电点为5.70，不稳定指数为34.01，无跨膜区域，存在1个信号肽，在4个铜离子结合区高度保守，且含有Cupredoxin超家族蛋白保守功能域。AcLAC蛋白与真菌的漆酶蛋白聚为一支，其中，AcLAC蛋白与木耳属真菌的漆酶蛋白亲缘关系最近。AcLAC融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）表达宿主中成功表达，分子量为67 kD。【结论】克隆获得的Aclac基因属于Cupredoxin超家族基因，可在原核表达系统中异源表达，推测其与其他真菌漆酶基因在生物学功能上具有一致性，丰富了真菌漆酶资源。

• 41份黄椒种质资源表型及SRAP遗传多样性分析

  邱胤晖, 林淑婷, 曾绍贵, 罗英, 朱邦彤, 李永清,

  【目的】对41份黄椒种质资源进行遗传多样性分析，为福建省筛选出抗性好、品质优的特色黄椒种质资源，也为后续优良黄椒品种选育的亲本选配提供参考。【方法】以41份黄椒种质为材料，对12个数量性状和10个描述性性状进行观测分析，并通过SRAP分子标记的扩增结果进行遗传多样性分析。基于表型测定数据和SRAP扩增结果进行聚类分析。【结果】12个数量性状的变异系数为14.20%~39.98%，平均为26.61%，其中，叶柄长、果长、单果重和单株果数的变异系数较大，均大于25.00%，说明这些性状存在丰富的变异，具有较好的遗传改良基础。10个描述性性状的多样性指数为0.1985~1.0791，平均为0.5061，以花青甙显色程度最高，以节间茸毛、生长势和植株形态的多样性指数较低。基于表型测定数据的聚类分析结果显示，可将41份黄椒种质材料分成四大类，第Ⅰ类群包括11份种质材料，第Ⅱ类群包括14份种质材料，第Ⅲ类群包括5份种质材料，第Ⅳ类群包括13份种质材料，整体来说，性状相似的种质资源聚为一类。利用14对SRAP引物组合共扩增出117条条带，其中有90条多态性条带，多态性比率达76.92%。基于SRAP分子标记的聚类分析结果显示，材料间相似系数变化范围在0.80~1.00之间，在遗传相似系数为0.85处，41份黄椒种质材料被分为六大类群，第Ⅰ和Ⅵ群组均仅含1份种质材料，第Ⅱ群组包括4份种质材料，第Ⅲ群组包括29份种质材料，第Ⅳ和Ⅴ群组均有3份种质材料，来源地相同的种质聚为一类。可见，基于SRAP分子标记的聚类结果比基于表型的聚类结果更倾向于亲缘关系的远近。【结论】黄椒种质资源具有丰富的遗传多样性。利用SRAP分子标记辅助黄椒新品种选育，筛选出亲缘关系较远的综合性状优良纯合材料，可有效解决辣椒育种中亲本选择效率低、育种进程慢等问题。

• 54份可可种质资源主要品质性状及相关分析

  谢薇, 赖剑雄, 秦晓威, 朱自慧, 李付鹏,

  【目的】对54份可可种质材料的主要品质性状进行比较分析，筛选出品质性状优良的种质，为可可新品种培育提供基础材料，也为探究可可品质性状的影响因素提供理论参考。【方法】以来源于不同国家的54份可可种质为材料，采用超声波超离法、气相色谱法和福林酚法测定可可脂、多酚、脂肪酸组分（棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油）含量及脂肪酸总含量，并对其进行变异分析、相关分析及聚类分析。【结果】54份可可种质中，XYS53的可可脂、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸含量及脂肪酸总含量均最低；XYS52的可可脂含量和脂肪酸总含量均最高；XYS18的棕榈酸含量最高；XYS17的硬脂酸含量最高；XYS52的油酸含量最高；XYS44的亚油酸含量最高；XYS20的多酚含量最高。7个品质性状指标的变异系数为11.52%~18.74%，其中棕榈酸、亚油酸和多酚的变异幅度较大，变异系数分别为18.74%、18.62%和14.42%；可可脂含量变异系数最小，为11.52%。可可脂含量与棕榈酸、硬脂酸和油酸含量呈极显著正相关（PPP>0.05，下同）。不同国家的可可种质间可可脂、硬脂酸、油酸、多酚含量及脂肪酸总含量无显著差异，但中国与泰国的可可种质间棕榈酸含量和亚油酸含量存在显著差异。主成分分析和聚类分析均发现，归属于类群Ⅰ的15份种质品质性状综合表现较好，且主要来自于中国和越南。【结论】可可种质的主要品质性状与其来源地间存在一定相关性。在可可品种选育过程中，需结合性状间相关性综合考虑可可品质性状表现，可优先选择中国和越南的15个综合性状优良的种质作为育种材料或亲本来培育优良可可品种。

• 庐山常绿落叶阔叶混交林土壤AM真菌资源及其分布特征

  吴佳海, 孔凡前, 刘苑秋, 邹芹, 张毅, 罗天宇, 秦敬泽, 刘玮,

  【目的】探究庐山常绿落叶阔叶混交林土壤AM真菌群落多样性及分布特征，为推动其地下AM真菌资源的开发利用提供理论基础。【方法】以庐山典型常绿落叶阔叶混交林5种常见树种［（杜鹃（Rhododendron simsii）、蜡瓣花（Corylopsis sinensis）、山橿（Lindera reflexa）、女贞（Ligustrum lucidum）、榆树Ulmus pumila）］根际土壤丛枝菌根真菌（AM真菌）为材料，通过孢子形态学鉴定方法研究其多样性特征、影响因素及分布特征。【结果】从庐山常绿落叶阔叶混交林中鉴定、分离出55个AM真菌类群，其中包括2个广布种、10个常见种与43个稀有种（按优势度水平划分），其中无梗囊霉属（Acaulospora属，24种）和球囊霉属（Glomus属，18种）为优势属。此外，不同树种根际AM真菌孢子密度、物种丰富度、Shannon指数、Pielou均匀度指数等指标差异总体上不显著（P>0.05），且群落相似度系数较高，其中山橿（L.reflexa）与蜡瓣花（C.sinensis）根际AM真菌群落相似度系数最高（73.85%）。不同树种根际AM真菌种属分布存在差异，其中稀有内养囊霉（Entrophospora infrequens，稀有种之一）只在山橿根际有所发现，稀有种球囊霉17（Glomus.17）只在杜鹃（R.simsii）根际发现，稀有种亮色盾巨孢囊霉（Scutellospora fulgida）只在女贞（L.lucidum）根际发现，稀有种扭形伞房囊霉（Corymbiglomus tortuosum）只在蜡瓣花根际发现。不同树种根系侵染率水平存在显著差异（PU.pumila）（38.60%）、杜鹃和女贞（31.67%）、山橿（29.73%）。通过典范对应分析（CCA）发现土壤因子（全磷、全氮、氨态氮、硝态氮、有机质、pH和含水率）对土壤AM真菌群落变异的解释度为7.29%，而消除趋势对应分析（DCA）分析发现植物种类对土壤AM真菌群落变异的解释度为15.72%。【结论】庐山常绿落叶阔叶混交林土壤AM真菌是以稀有种为主的分布模式，该模式下的AM真菌及分布受宿主植物与土壤养分影响较小。

• 南方红壤丘陵区不同土地利用方式土壤N2O排放系数研究

  王芝麟, 邹彬, 张涵, 郭季璞, 韩林蓉, 王逗, 李玲玲, 秦红灵, 郭家骅,

  【目的】明确不同土地利用方式土壤氧化亚氮（N2O）排放系数的差异并评估区域N2O排放，为评估南方红壤丘陵区N2O排放清单提供基础数据和参考依据。【方法】选择南方红壤丘陵区4种常见的土地利用方式（油茶林、旱地农田、稻田和松林），通过分析土壤不施肥与施氮肥时N2O排放速率和排放量的差异，计算排放系数，并用15N同位素标记方法探究硝化作用和反硝化作用对土壤排放N2O的相对贡献。【结果】不同土地利用方式土壤理化性质差异明显，稻田全氮含量最高（2.22 g/kg），显著高于其他3种土地利用方式土壤（P2O排放速率在0~227.80 μg/（kg&#183;h），施氮量为200 kg N/ha时，N2O排放速率在0~4213.27 μg/（kg&#183;h）。4种土地利用方式的土壤N2O排放系数均随土壤孔隙含水量（WPFS）增加而增加，WPFS为75%时，稻田、旱地农田、油茶林和松林土壤N2O排放系数分别为2.47%、0.39%、2.31%和0.91%。4种土地利用方式土壤N2O排放系数主要受全氮含量影响，N2O累积排放量均与潜在反硝化潜势呈显著正相关，除稻田外，其他3种土地利用方式土壤N2O累积排放量也与潜在硝化势呈显著正相关，以NO3--N为底物的反硝化作用对N2O排放的相对贡献平均大于90.00%，远高于硝化作用。【结论】南方红壤丘陵区土壤以NO3--N为底物的反硝化作用主导N2O排放，施用氨基氮肥可能有效减少氮肥N2O排放损失，为国家执行碳中和政策提供理论依据。

• 减量化肥配合炭基有机肥对设施切花月季生长及土壤性状的影响

  曾猛, 潘玉蕊, 彭银, 达布希拉图,

  【目的】探究减量化肥配合炭基有机肥施用对设施切花月季的生长、土壤养分以及土壤盐渍化指标的影响，为科学利用炭基有机肥实现设施切花月季的减肥增质和土壤改良提供技术参考。【方法】以切花月季品种国魂为试材、炭基有机肥为土壤改良材料，共设4个试验处理：常规化肥（CK），炭基有机肥+常规化肥（BF处理），减量化肥40%（CK40处理），炭基有机肥+减量化肥40%（BF40处理）。随机区组设计，进行一点6茬连续试验，比较每一茬中不同处理对切花月季的生长、土壤性状以及盐渍化等指标的影响。【结果】与CK相比，BF40处理使6茬切花月季的株高、茎粗、产量及A级花比例显著增加（P<0.05，下同），分别最大提高23.29%、19.86%、25.56%和149.21%，且在产量的稳定性和可持续性方面表现出显著优势；同时，BF40处理使耕层土壤中的有机质、碱解氮、有效磷和速效钾的含量显著提高，且耕层土壤的pH值稳定在6.7~7.7。与CK相比，各试验处理均能改善耕层土壤盐渍化状况，BF40处理的改良效果显著，且BF处理和BF40处理均能显著提高土壤保肥能力。同时，BF处理和BF40处理能显著增加土壤中细菌、真菌和放线菌的数量，且BF40处理中细菌、真菌和放线菌的数量分别最大提高150.64%、220.95%和179.27%。【结论】施用生物炭基有机肥可有效缓解月季栽培设施内的土壤酸化、盐渍化问题，有利于切花月季生产中的提质增效，且在减量40%化肥的情况下配施效果更佳，可为设施条件下切花月季的生产和土壤改良提供技术参考。

• 不同药剂对辣椒疫病防治效果及根际微生物种群的影响

  张爱民, 梁传静, 蓬桂华,

  【目的】研究不同药剂对辣椒疫霉菌的生长抑制作用以及对辣椒疫病的田间防效和对辣椒的增产作用，旨在筛选出可有效防控辣椒疫病并对辣椒根际土壤微生物群落结构影响较小或有益的防控药剂，为辣椒疫病防控提供指导。【方法】以辣椒疫霉菌Ph2为试验材料，采用菌丝生长抑制法对15种药剂进行初筛；以生长抑制率为100.00%的药剂为候选药剂，辣椒疫病高发田块为试验地，采用随机区组试验设计，以灌根法为主要施药方式，统计施药后不同时段辣椒疫病发病率、病情指数并计算防效；收获期测定不同药剂处理辣椒生长及产量指标，计算增产率；采集辣椒根际土壤，采用平板计数法测定土壤细菌、真菌和放线菌菌落数量，计算细菌/真菌比，探索不同药剂对辣椒根际土壤微生物种群的影响。【结果】对辣椒疫霉菌生长抑制率为100.00%的药剂有6种，分别为33.5%喹啉铜SC、80%烯酰吗啉WG、72%霜脲&#183;锰锌WP、687.5 g/L氟菌&#183;霜霉威SC、23.4%双炔酰菌胺SC和64%噁霜&#183;锰锌WP；田间防效试验结果显示，第3次药后33 d防效最好的是氟菌&#183;霜霉威（93.86%），其次为噁霜&#183;锰锌（71.78%）；各药剂处理对辣椒生长指标影响差异不显著（P>0.05）；鲜椒推测产量最高的是噁霜&#183;锰锌处理（22.74 t/ha），氟菌&#183;霜霉威处理次之（21.29 t/ha），较CK分别增产29.52%和21.22%；各药剂处理下的细菌/真菌比表现为霜脲&#183;锰锌>氟菌&#183;霜霉威>噁霜&#183;锰锌>喹啉铜>双炔酰菌胺>烯酰吗啉，以霜脲&#183;锰锌处理最高，为13.85，极显著高于其他药剂处理（P<0.01）。【结论】氟菌&#183;霜霉威和噁霜&#183;锰锌对辣椒疫病有较好的防效且增产作用明显，对土壤细菌生物量影响较小，可作为辣椒疫病的防治药剂加以利用。

• 沃柑日灼果皮结构和生理生化指标观测分析

  胡艺帆, 葛聪聪, 李凤琪, 邱发发, 黄世炎, 韦杰, 黄桂香,

  【目的】探究沃柑日灼的果皮形态和相关指标变化，初步明确沃柑日灼的生理机制，为防控柑橘日灼提供一定的理论依据。【方法】以5年生香橙砧沃柑为试材，以正常果为对照，对日灼的沃柑果皮进行石蜡切片与扫描电镜观察，测定果皮可溶性蛋白质及营养元素含量、酶活性及叶片的蒸腾速率、叶绿素，分析其变化规律。【结果】随着沃柑日灼加重，果皮表面油胞逐渐扩张破裂形成沟壑，灼伤部位从黄皮层到白皮层逐渐破裂，果皮可溶性蛋白质含量降低；沃柑发生日灼后，其叶片蒸腾速率增高、叶绿素含量降低；果皮中K、Ca、Cu和Zn的含量分别显著减少2.22 mg/g、1.95 mg/g、2.22%和9.84%（绝对值）（P2-）和丙二醛（MDA）含量分别上升85.5%和55.2%，过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）活性分别上升74.7%、64.2%和45.1%，超氧化物歧化酶（SOD）活性下降44.6%。【结论】沃柑果实随着日灼程度加重，对果皮细胞的保护能力下降；抵御外界光、热胁迫能力降低。因此，防控柑橘日灼可从增施水肥、补充所缺营养元素、降低叶片蒸腾速率、保护果皮及适当留晚夏梢等方面综合考虑。

• 夜间延时补光调控对巨峰葡萄春果生长发育及光合特性的影响

  黄秋凤, 陈立, 李敏, 谢蜀豫, 曹慕明, 李玮, 黄羽, 管敬喜, 黄竟, 陈国品,

  【目的】探讨3种光质补光对巨峰葡萄春果生长发育及光合特性的影响，为完善广西巨峰葡萄春果栽培管理技术提供理论依据。【方法】以5年生设施栽培巨峰葡萄为试验材料，在新梢展叶期至果实成熟期，应用白、红、蓝3种光质进行夜间非连续光照6 h（03：00—06：00和18：00—21：00）处理，以自然光照为对照（CK），研究不同补光处理对巨峰葡萄春果新梢生长、叶片叶绿素含量、光合生理及果实生理生化等指标的影响。【结果】在3种不同光质补光条件下，巨峰葡萄春果新梢基部粗度、1~10节总长度、叶长、叶宽、叶柄长和叶厚均高于CK；其中蓝光6 h处理的新梢基部粗度和1~10节总长度增量最大，分别较CK显著增加12.80%和27.00%（P2浓度和果实可滴定酸含量呈现不同程度降低。【结论】在巨峰葡萄春果栽培过程中，夜间补充白光6 h和红光6 h能在一定程度上弥补光照的不足。因此，可通过人工补光调节葡萄的生长发育状况，提高果实品质。

• LED光照萎凋对贡眉白茶香气品质的影响

  黄藩, 张厅, 夏陈, 王迎春, 唐晓波, 徐斌, 罗凡,

  【目的】明确不同LED光照萎凋对贡眉白茶香气成分的影响，为白茶加工全天候和标准化光照萎凋生产提供理论支撑。【方法】以无光萎凋作对照，采用感官审评法，顶空固相微萃取法结合气相色谱—质谱联用技术（HSSPME-GC-MS），同时采用气味活度值（OAV），系统研究LED红光（630 nm）、黄光（570 nm）、蓝光（430 nm）和日光萎凋对贡眉白茶香气成分的影响。【结果】4种光照萎凋的贡眉白茶感官审评中香气得分均高于无光萎凋，其中黄光组的香气得分（89.1分）最高，呈现花香，其他3种光质以清香为主。所测样品中共检测出16种醛类、17种醇类、10种酯类、11种酮类、10种碳氢化合物及其他香气成分等共计68种，其中各处理共有成分58种。4种光质均可提高贡眉白茶样品的香气成分总量，其中黄光萎凋下贡眉白茶的香气成分总量（279.736 μg/L）最高，且醛类（46.787 μg/L）、醇类（173.163 μg/L）、酮类（16.889 μg/L）、杂氧化合物（6.823 μg/L）、碳氢化合物类（12.574 μg/L）、醚类（0.388 μg/L）及含硫化合物（3.608 μg/L）的成分含量均高于其他光质和无光处理。顺-氧化芳樟醇、反-氧化芳樟醇、顺-芳樟醇氧化物（呋喃型）、反-芳樟醇氧化物（吡喃型）、苯甲醛、苯乙醛、癸醛、β-环柠檬醛、顺-柠檬醛、丁醚和二甲硫等有益白茶香气品质形成的香气成分均为黄光组的含量最高。共得到5个OAV相对较高的香气成分，依次为β-紫罗酮、芳樟醇、壬醛、二甲硫和反-2-癸烯醛，对所测样品的香气形成贡献较大。【结论】LED黄光萎凋最有益于提高贡眉白茶的香气因子得分，可增加香气成分总含量，形成良好的香气品质特征，可优先考虑作为白茶全天候加工制作的补偿光源。

• 滴灌施肥对果桑生长发育及产量品质的影响

  邓真华, 王军文, 王亚威, 王丰, 余元善, 胡桂萍, 曹红妹, 杜贤明,

  【目的】分析滴灌条件下不同施肥处理对果桑生长发育及产量品质的影响，为指导设施果桑水肥高效利用和管理提供参考依据。【方法】以11年生的667 m2栽植150株+二级支干整形模式的果桑大10为试材，在同一滴灌条件下，设置5个不同施肥处理［T1：滴灌随水施肥量100%；T2：滴灌随水施肥量80%；T3：滴灌随水施肥量60%；T4：滴灌随水施肥量40%；对照（CK）：常规穴施量100%］，连续2年田间定位试验，分析滴灌下不同施肥水平对果桑生长发育及产量品质的影响，并采用模糊数学隶属函数法进行综合评价。【结果】滴灌随水施肥量60%、80%和100%的果桑枝叶生长和产果量均高于CK，其中叶片重、单果质量和株产果量分别较CK提高11.55%~27.06%、10.24%~14.44%和15.07%~24.64%，且单果质量显著高于CK（P0.05，下同）；滴灌随水施肥量60%、80%和100%的桑果pH、黄酮和花青素含量均显著高于CK，分别较CK提高1.58%~3.17%、21.94%~35.61%和25.00%~62.50%，可溶性固形物和可溶性糖含量虽较CK提高0.83%~1.42%和1.72%~4.39%，但与CK间差异不显著；滴灌随水施肥量80%和100%的多酚含量显著高于滴灌随水施肥量60%和CK，分别较CK提高14.78%和12.56%，滴灌随水施肥量60%的多酚含量较CK提高3.45%；滴灌随水施肥量40%各指标值均低于CK或与CK差异不明显；采用隶属函数法对不同施肥处理的果桑经济性状和营养品质进行综合评价，综合排序为T1处理>T2处理>T3处理>CK>T4处理，以滴灌随水施肥量60%以上的综合表现明显优于常规穴施量100%。【结论】与常规穴施量100%相比，滴灌随水施肥量60%以上有利于促进设施果桑枝叶生长、提升桑果产量和品质，节肥增产效果明显，宜在生产实践中推广应用。

• 减数分裂关键基因Spo11和Mlh1在鲫鲤杂交鱼中的遗传分析

  朱辣, 张美文, 朱明, 李琪, 贺旺超, 秦伟玲, 周毅, 杨聪慧, 张纯, 刘少军,

  【目的】明确鲫鲤杂交鱼减数分裂关键基因（Spo11和Mlh1）的序列和表达特征，揭示异源双亲减数分裂因子在杂交品系的传代中是否存在选择压力，为解析远缘杂交跨越生殖障碍打下遗传学基础。【方法】以已形成稳定品系的鲫鲤杂交鱼为研究对象，包括红鲫（RCC）、湘江野鲤（CC）、鲫鲤杂交子代（F1）和异源四倍体鲫鲤（4nAT），通过分子克隆、序列比对及Western blotting等方法研究Spo11基因和Mlh1基因在鲫鲤杂交鱼中的遗传规律和表达特征，并分析其与原始父母本间的关系。【结果】RCC、CC、F1和4nAT的Spo11基因CDS序列绝大部分为1152 bp，仅4nAT中存在1157 bp的CDS序列；在F1和4nAT中均稳定获得2种原始亲本的独立遗传片段，且在4nAT中还检测到原始父母本重组基因片段［4n-SPO11-11-2（MT648223）］，其与原始母本RCC-Spo11基因对应片段的相似性为96.2%，与原始父本CCSpo11基因对应片段的相似性为93.7%，表明Spo11基因表达模式并非完全保守性及4nAT存在遗传变异性。Mlh1基因CDS序列在鲫鲤杂交鱼中同样稳定存在，表现出稳定的杂合遗传特征，即F1和4nAT中既存在RCC-Mlh1基因CDS序列（相似性为99.5%），也存在CC-Mlh1基因CDS序列（相似性为99.4%），鲫鲤杂交鱼相应的遗传片段和原始亲本间仅存在极少的基因位点变异。Western blotting检测结果表明，SPO11蛋白和MLH1蛋白在鲫鲤杂交子代中均能正常表达。其中，4nAT的精巢中仅表达相对分子量较大的SPO11-β亚体，而F1的精巢中仅表达相对分子量较小的SPO11-α亚体。【结论】F1和4nAT能稳定杂合遗传原始亲本RCC的Spo11基因和Mlh1基因，虽然在CDS序列结构上存在少量差异，但最终都能独立表达相关蛋白，即杂交鱼形成过程中减数分裂关键基因的表达正常可为其跨越生殖障碍打下分子基础。

• 慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因敲除

  徐天鹏, 吴思乐, 温健, 韦义荣, 李思佳, 谢龙, 虞霖田, 宋中宝, 陆阳清,

  【目的】探索在慢羽鸡成纤维细胞中敲除ev21基因的可行性，净化鸡群内源性逆转录病毒，同时为快速培育缺失ev21基因的慢羽鸡配套系打下基础。【方法】根据ev21基因序列（KY235336）特点，分别在其5'和3'端各设计2个sgRNA，用于构建4种不同sgRNA的打靶质粒，筛选出在5'和3'端打靶效率较高的sgRNA。然后基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对ev21基因进行剪切，并通过同源重组方式以红色荧光蛋白（mCherry）的DNA片段（CAG-mCherry）替换ev21基因，实现对慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因定点敲除。【结果】在慢羽鸡成纤维细胞中能检测到ev21基因，构建的4种sgRNA（sgRNA1~sgRNA4）均能成功插入对应的打靶质粒中，经嘌呤霉素筛选及T7E1酶切检测，发现转染4种不同sgRNA打靶质粒后慢羽鸡成纤维细胞均有不同程度的死亡，其中又以sgRNA1和sgRNA3的基因敲除效率较高。同时针对同源位点左右同源臂构建表达mCherry的供体质粒，以其转染293T细胞12 h后均能表达出mCherry。以sgRNA1和sgRNA3打靶质粒及供体质粒共同转染慢羽鸡成纤维细胞，观察发现成纤维细胞内的mCherry持续表达，至转染后第30 d通过流式细胞仪分选收集红色荧光阳性成纤维细胞，并提取其总DNA进行PCR鉴定与基因测序，结果显示红色荧光阳性成纤维细胞中有目的片段（CAG-mCherry）插入，即以插入替换方式能实现对ev21基因的敲除。【结论】基于crispr/cas9基因编辑技术的基因敲除方法能成功敲除慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因，为培育缺失ev21基因的慢羽鸡品系提供技术支持。

• 中华绒螯蟹过氧化物还原酶基因克隆及其在鳗弧菌感染下的表达分析

  李辉, 冯伟, 唐永凯, 苏胜彦, 王美垚, 李建林,

  【目的】克隆中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）过氧化物还原酶基因（EsPrx）的开放阅读框（ORF），并分析EsPrx基因的组织表达特征及细菌感染下的表达情况，为中华绒螯蟹的先天免疫和抗病机制研究提供参考依据。【方法】通过RT-PCR结合转录组序列比对克隆出EsPrx基因，利用DNAStar、ClustalW、ExPASy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 5.0及NetPhos 3.1 Server等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测EsPrx基因的组织表达特征及鳗弧菌（Vibrio anguillarum）感染下的表达情况。【结果】EsPrx基因ORF为597 bp，共编码198个氨基酸残基，含有Prx特有的2个结构域（FYPLDFTFVCPTEI和GEVCPA）。EsPrx蛋白分子式为C994H1544N258O293S8，分子量为22.05 kD，理论等电点（pI）为5.67，无跨膜域和信号肽，属于非分泌性蛋白。EsPrx氨基酸序列与扁额青蟹（Eurypanopeus depressus）、拟穴青蟹（Scylla paramamosain）和三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）的Prx氨基酸序列高度同源，对应的相似性分别89%、89%和88%；基于Prx氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示，EsPrx氨基酸序列先与拟穴青蟹、扁额青蟹及南美白对虾（Penaeus vannamei）的Prx氨基酸序列聚在一起，再与其他动物的2-Cys Prx氨基酸序列聚类，证实EsPrx基因属于未分化的Prx基因，即Prx1/2基因。EsPrx基因在中华绒螯蟹各组织中广泛表达，以肝胰腺的相对表达量最高，极显著高于在其他组织中的相对表达量（PEsPrx基因表达在鳗弧菌感染不同时间段存在明显差异，感染6~24 h其相对表达量显著升高（PEsPrx基因为甲壳动物未分化的Prx1/2基因，在中华绒螯蟹肝胰腺中高表达，并参与鳗弧菌感染的抗氧化应激反应，即在抗逆过程中发挥重要作用。

• miR-486对绵羊骨骼肌卫星细胞增殖及PI3k-Akt信号通路相关基因表达的影响

  王世银, 张伟, 刘晓娜, 杨力伟, 邓双义,

  【目的】明确miR-486对绵羊骨骼肌卫星细胞增殖及PI3K-Akt信号通路相关基因表达的影响，为揭示miR-486对绵羊骨骼肌发育的调控机制打下基础。【方法】以巴什拜羊1日龄羔羊后肢骨骼肌卫星细胞为研究对象，通过转染miR-486 mimics和miR-486 inhibitor致使绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调或下调，探究miR-486对骨骼肌卫星细胞增殖速度及PI3K-Akt信号通路中PTEN、GSK3b、PRKCα、Raf-1、MAPK1、PKN1、Casp9和SGK1等8个相关基因表达变化的影响。【结果】空白对照及转染miR-486 mimics、miR-486 mimics negative control和miR-486 inhibitor negative control的绵羊骨骼肌卫星细胞均表现出典型的S形增殖曲线，但各处理间的细胞增殖速度存在明显差异。当绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调可促使细胞进入快速增殖状态，而miR-486水平下调可使细胞保持静止状态。实时荧光定量PCR检测结果表明，当绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调时，可引起PTEN、Raf-1和MAPK1基因相对表达量极显著下调（PPRKCα和PKN1基因相对表达量极显著上调，SGK1基因相对表达量显著上调（PGSK3β和Casp9基因相对表达量在不同处理组绵羊骨骼肌卫星细胞间的差异均不显著（P>0.05），可能在维持绵羊骨骼肌卫星细胞基本生命活动中发挥作用。【结论】miR-486通过调控PI3K-Akt信号通路相关基因的表达而参与绵羊骨骼肌卫星细胞生长发育及增殖，为深入研究miR-486对绵羊骨骼肌发育的调控机理及优质肉羊品种培育打下了理论基础。

• SNP标记位点与罗氏沼虾生长性状的相关分析

  周晓敏, 孔嘉明, 戴习林,

  【目的】明确SNP标记位点与罗氏沼虾生长性状间的关联性，为罗氏沼虾生长性状候选基因的寻找、生长性状调控机理及后期分子标记辅助育种研究打下基础。【方法】采用直接测序技术对25个SNP标记位点在罗氏沼虾生长性状极端群体中进行多态性检测。采用卡方检验（χ2）筛选出2个极端（体长极大和极小）罗氏沼虾群体中与生长状况存在潜在相关性的SNP标记位点，进一步对罗氏沼虾浙江群体60个个体进行SNP基因型与生长性状（体长、头胸甲宽、第一腹节宽、第一腹节高和体重）的关联分析。运用一般线性模型对SNP标记位点与罗氏沼虾5个生长性状的关联性进行检测。【结果】卡方检验结果显示，SNP6、SNP7、SNP16、SNP20和SNP24等5个标记位点在罗氏沼虾极端群体中与生长性状存在潜在相关。5个潜在相关SNP标记位点与生长性状的相关性分析结果表明，SNP6、SNP7、SNP16和SNP24等4个位点与生长性状呈显著（PPHSP90和HGS基因可能是与罗氏沼虾生长相关的重要功能基因，研究结果为下一步基因定位及分子标记辅助育种提供了更多的标记基础。

• 都柳江易危鱼类小口白甲鱼种群遗传多样性的AFLP分析

  安丹丹, 代应贵, 韩雪,

  【目的】从分子水平揭示珠江水系都柳江小口白甲鱼种群遗传结构和多样性的特点，探讨其致危原因及机制，为开展小口白甲鱼种群保护提供科学依据。【方法】于贵州境内都柳江三都、兴华和榕江3个采样点共采集30尾小口白甲鱼，筛选8个引物组合对都柳江小口白甲鱼种群全基因组DNA进行AFLP分析，采用PopGene32进行位点总数和多态位点数统计，并计算Shannon’ s信息指数（I）、Nei基因多样性指数（H）、多态信息含量（PIC）、观测等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）及个体遗传距离（DA）等遗传参数。【结果】采用8个引物组合从都柳江小口白甲鱼种群中共扩增出699条扩增片段，片段长度为69~500 bp，平均每个引物组合扩增获得87.38个位点。在699个扩增位点中，有663个位点为多态位点，多态位点数占总位点数的94.85%。699个扩增位点在30尾都柳江小口白甲鱼个体中的出现频率可划分为10个区间，其中，频率区间30%~89%的扩增位点数差异不明显，而频率区间0~9%和90%~99%的扩增位点数出现峰值。都柳江小口白甲鱼种群的I、H、PIC、Na、Ne平均值分别为0.3490、0.2206、0.6404、1.9464和1.3574，个体间的DA为0.2305~0.4440，平均为0.3304；基于DA构建的都柳江小口白甲鱼种群UPGMA系统进化树显示，30尾都柳江小口白甲鱼聚成两大分支，即个体18单独聚为一个分支，而其余29尾都柳江小口白甲鱼个体聚为另一分支。【结论】都柳江小口白甲鱼种群遗传多样性丰富，但存在有效种群规模变小及有效等位基因丢失的现象，推测其为生态濒危物种，应采取相关措施对都柳江小口白甲鱼种群进行科学保护。

• 三斑海马早期发育观察

  周胜杰, 胡静, 杨蕊, 杨其彬, 马振华,

  【目的】明确三斑海马早期发育阶段各主要器官形态指标的异速生长现象，丰富三斑海马发育的基础生物学数据，同时为完善我国三斑海马人工育苗技术提供参考依据。【方法】以0~28日龄三斑海马为研究对象，运用光学显微镜结合个体生态学的方法进行早期发育观察，并测量各主要器官形态性状，构建异速生长模型。【结果】三斑海马与大多数鱼类形态差异明显，游泳器官为胸鳍、背鳍和臀鳍，无腹鳍和尾鳍；尾部延长，具有较强攀附功能；体表及头部具有突出的棘；吻延长，其长度约占头长的50%。三斑海马全长与日龄的关系方程为y=0.9869x+7.9538（R2=0.9860）。在0~28日龄发育阶段，三斑海马的尾长（异速生长指数1.1472）呈正异速生长，吻长（异速生长指数0.9568）呈等速生长，头长（异速生长指数0.8801）、眼径（异速生长指数0.7629）、头高（异速生长指数0.8836）、口径（45&#176;的异速生长指数0.6803，90&#176;的异速生长指数0.6252）、躯干长（异速生长指数0.8787）、体高（异速生长指数0.8914）、尾柄高（异速生长指数0.9428）、背鳍长（异速生长指数0.8483）及臀鳍长（异速生长指数0.6923）均呈负异速生长；头冠长和胸鳍长出现拐点，其中，头冠长的生长拐点依次为8日龄和12日龄，胸鳍长的生长拐点依次为16日龄和24日龄。【结论】三斑海马吻长等速生长保证其摄食口径和捕食能力，尾长正异速生长提供强大的攀附能力，头冠的生长速度变化在特定阶段为其提供保护，而特定阶段的胸鳍快速发育可有效提高其捕食能力。三斑海马早期生长发育过程中存在异速生长现象，主要优先发育攀附功能器官，其次是摄食器官。

• 环境规制下我国粮食生产绿色全要素生产率分析

  井莉,

  【目的】研究环境规制对我国粮食生产绿色全要素生产率，为我国粮食绿色高质量发展提供决策依据。【方法】利用超越对数函数测算2011—2019年我国粮食全要素绿色生产率及分解值，采用Tobit模型探究粮食生产经济发展、人力资本水平和粮食生产财政支出对粮食生产绿色全要素的影响。【结果】从整体上看，我国31个省份（除港澳台）粮食生产绿色全要素生产率从2011年的1.002增长至2019年的1.080，呈波动变化趋势；未考虑环境规制因素的粮食全要素生产率从2011年的1.032增长至2019年的1.035，也呈现波动的增长趋势，各年平均值高于考虑环境规制因素。在考虑环境规制因素的粮食生产绿色全要素生产率分解中，绿色全要素生产率的增长主要通过技术进步增长而增长，技术效率对绿色全要素生产率呈抑制趋势。从不同地区来看，粮食生产绿色全要素生产率呈现东高西低趋势。粮食生产经济发展水平对全国和东部地区粮食生产绿色全要素生产率影响呈先弱后逐步增强的变化趋势，中部和西部地区粮食生产经济发展水平对粮食生产绿色全要素生产率均先增强后逐步减弱的发展趋势。从不同影响因素对粮食绿色全要素生产率影响来看，人力资本对全国及东部地区粮食生产绿色全要素生产率存在显著正向影响，对西部地区呈显著负向影响；粮食生产财政支出对全国和中部地区粮食生产绿色全要素生产率存在显著正向影响。【建议】政府应充分发挥粮食主产区的功能性优势，大力推进专业化生产与要素资源配置，转变不同地区粮食生产发展方式；相关部门应加大粮食生产人力资本投入，加强对人才扶持力度；相关决策机构应加强规范粮食生产环境立法机制，发挥发挥政府差异化粮食生产环境规制策略。