南方农业学报杂志

南方农业学报杂志2024年第12期

• 叉角厉蝽对棉铃虫幼虫的捕食能力及捕食效率分析

  陈俊华, 尤伟晨, 徐孟飞, 陈瑶瑶, 鲁锰, 侯鑫富, 周洲, 刘红敏,

  【目的】明确叉角厉蝽（Eocanthecona furcellata）对棉铃虫（Helicoverpa armigera）幼虫的生物防控潜能，为棉铃虫的田间生物防控研究提供参考。【方法】利用捕食功能反应评估叉角厉蝽4和5龄若虫及雌成虫对棉铃虫2和3龄幼虫的捕食功能反应、搜寻效应和捕食效率，并采用干扰效应模型分析叉角厉蝽5龄若虫和雌成虫捕食棉铃虫2龄幼虫时的种内干扰效应。【结果】叉角厉蝽4和5龄若虫及雌成虫对棉铃虫2和3龄幼虫均具有一定的捕食能力，且捕食量随着猎物密度的增加而逐渐增加，但其增加幅度随着棉铃虫幼虫密度增加而逐渐减缓；同时，随着猎物龄期的增大，相同发育阶段叉角厉蝽的捕食量逐渐减少。叉角厉蝽4和5龄若虫及雌成虫对棉铃虫2龄幼虫的日最大捕食量分别为32.776、39.756和47.064头，其中，以叉角厉蝽雌成虫对棉铃虫2龄幼虫的控害效能（40.748）最高、瞬时攻击率（0.866）最大、对猎物的处理时间（0.021 d）最短。叉角厉蝽对棉铃虫幼虫的搜寻效应随棉铃虫密度的增加而降低，在同一猎物密度下叉角厉蝽的搜寻效应表现为雌成虫>5龄若虫>4龄若虫。叉角厉蝽4和5龄若虫及雌成虫对棉铃虫2龄幼虫的搜索时长和成功刺吸时长差异均不显著（P>0.05），但雌成虫刺吸时长显著长于4和5龄若虫（P<0.05）。同时，叉角厉蝽的捕食作用受自身密度的干扰作用影响，5龄若虫和雌成虫对棉铃虫2龄幼虫的平均捕食量和捕食作用率均随种群密度的增加逐渐下降，且叉角厉蝽雌成虫的种内干扰作用大于5龄若虫，雌成虫的最大分摊竞争强度为0.731,5龄若虫为0.687。【结论】叉角厉蝽对棉铃虫具有较强的控害能力，其中雌成虫对棉铃虫2龄幼虫的控害能力最强。在田间应用叉角厉蝽防治棉铃虫时，应在棉铃虫幼虫2龄期前开展，以充分发挥天敌的捕食控害能力。

• 金顶侧耳种质资源遗传多样性分析及耐高温种质筛选

  叶建强, 张芳芳, 陈娜, 蓝桃菊, 黄卓忠, 陈丽新, 祁亮亮,

  【目的】分析金顶侧耳种质ISSR分子标记及农艺性状的遗传多样性，为广西地区耐高温品种选育及遗传改良提供参考。【方法】以29株金顶侧耳菌株为材料，对其进行ISSR分子标记检测、表型性状测定和耐热性鉴定，分析其遗传多样性，并对其进行聚类分析、相关分析和主成分分析，筛选出商品性佳、耐高温的种质。【结果】利用筛选出的16个ISSR引物对29株金顶侧耳菌株进行聚类分析，结果显示，供试菌株间遗传相似系数为0.67～0.96，在遗传相似系数为0.79时，可分为14个类群，其中广西地区种质分布9个类群，包括3个野生种质类群，说明金顶侧耳种质遗传差异较大，遗传背景丰富。去除未出菇和表型性状相同的菌株，其余26株金顶侧耳菌株表型性状的Shannon-wiener多样性指数（H'）为0.516～2.010，其中菌盖横径的i>H'最高，菌棒成活率的i>H'最小；基于数量性状将其分成七大类群，其中广西地区种质分布六大类群，其中第Ⅰ类群种质每丛子实体数量较多、较小，可用作观赏；第Ⅱ类群为广西区外品种，每丛子实体数量多，第1潮菇产量高，可用作子实体数量和首潮菇产量的改良；第Ⅲ类群为广西栽培菌株，每丛子实体数量少，可用作子实体数量的改良；第Ⅳ类群为广西栽培品种，菌盖大，可用作菌盖大小改良；第Ⅴ类群菌盖颜色深、菌盖横径与菌柄长度的比值高，可用于菌盖颜色和菇形改良；第Ⅵ类群为广西主推品种，早熟且综合农艺性状优良，可用作早熟和商品性状改良的亲本材料；第Ⅶ类群为广西野生种质，幼菇菌盖鳞片颜色深，产量高，可用于鳞片颜色及高产改良。22个表型性状中，呈极显著（P<0.01，下同）相关的性状有28对，呈显著（P<0.05）相关的性状有21对，其中第1潮菇产量与每丛子实体数量、菌柄长度与菌盖横径与菌柄长度的比值分别呈极显著正或负相关（|r|>0.800），成熟时间与总产量呈极显著负相关（r=-0.636）。7个主成分对表型变异的累计方差贡献率达83.117%。菌株耐热性试验鉴定结果显示，26株亲缘关系明晰且正常出菇的菌株分为耐热型9株、中间型12株、不耐热型5株，各类型材料在广西地区均有分布。【结论】广西金顶侧耳种质资源具有丰富的遗传多样性，育种潜力巨大，可将子实体数量作为首潮产量性状进行改良，成熟时间作为总产量性状进行改良，菌柄长度作为菌盖横径与菌柄长度的比值性状进行筛选。

• 双孢蘑菇不同潮次采收期转录组差异表达分析

  郭姿儿, 冯伟林, 金群力, 宋婷婷, 沈颖越, 王梅, 张军, 范丽军, 赵睿萌, 蔡为明,

  【目的】分析双孢蘑菇不同潮次采收期转录组差异表达，为筛选影响双孢蘑菇产量和品质的关键基因及双孢蘑菇的高效栽培提供理论参考。【方法】以双孢蘑菇A15为试验材料，利用转录组测序（RNA-Seq）技术对双孢蘑菇第1潮次采收期（CZ1）、第2潮次采收期（CZ2）、第3潮次采收期（CZ3）样品进行分析。将RNA-Seq数据序列比对参考基因组筛选差异表达基因，对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析，并通过实时荧光定量PCR验证RNA-Seq结果的准确性。【结果】不同潮次样品共获得58.54Gb的Cleandata,Q20为98.41%～98.49%,Q30为95.01%～95.24%，有效碱基占比为49.00%～49.70%。以CZ1样品为对照组，在CZ2和CZ3样品中分别筛选到849和1297个差异表达基因，CZ1 vs CZ2组和CZ1 vs CZ3组中共有545个差异表达基因，CZ1 vs CZ2组、CZ1 vs CZ3组和CZ2vsCZ3组中共有90个差异表达基因。差异表达基因GO功能注释分析结果显示，CZ1vsCZ2组、CZ1vsCZ3组中差异表达基因被注释到的GO功能分为生物过程、分子功能和细胞组分三大功能类别。KEGG信号通路分析结果显示，CZ1vsCZ2组和CZ1vsCZ3组中代谢途径、抗生素的生物合成以及次生代谢产物的合成等信号通路被显著富集。从高表达量的差异表达基因中筛选出10个差异表达基因进行分析，CZ3样品中酪氨酸酶基因（TYR）表达量是CZ1样品的7.04倍，CZ1样品中过氧化氢酶基因（CAT3）表达量达到峰值，为CZ3样品的3.20倍。4个差异表达基因的表达趋势与RNA-Seq分析结果基本一致。【结论】从3个不同潮次采收期A15双孢蘑菇样品差异表达基因中筛选到10个高表达量基因，其中包括催化黑色素生成的关键限速酶基因TYR及过氧化氢酶的编码基因CAT3。不同潮次采收期双孢蘑菇的抗氧化能力不同，第1潮次采收期双孢蘑菇的抗氧化能力最强，而第3潮次采收期的抗氧化能力最弱。

• 巨大侧耳耐高温优质新种质创制及评价

  刘旭晗, 骈永茹, 步连燕, 李勤奋, 杨阳, 程汉亭,

  【目的】利用单核体杂交技术创制巨大侧耳新菌株，并对杂交菌株进行评价，以期为热区食用菌产业提供耐高温优异种质资源。【方法】基于菌株来源、耐高温测定和出菇农艺性状等评价指标，选取农艺性状优良且互补、耐高温差异明显的巨大侧耳菌株PG46和PG79作为杂交亲本，通过原生质体单核化和单孢分离技术获得单核菌株，并对其进行交配型鉴定。将不同来源、不同交配型的单核菌株进行对峙培养杂交，结合显微镜观察锁状联合结构和拮抗线的方法，筛选获得新菌株，对其进行耐高温检测、出菇农艺性状和子实体营养成分测定，筛选出热区适栽的耐高温、高产、优质的巨大侧耳新种质。【结果】利用原生质体单核化和单孢分离技术，从PG46菌株获得14个单核菌株，其中7个为A1B1交配型，7个A2B2交配型；从PG79菌株获得8个单核菌株，其中2个为A1B1交配型，6个为A2B2交配型。通过单核体两两杂交后共获得28个杂交组合，通过显微镜观察，初步筛选到15个杂交菌株具锁状联合结构，其中9个杂交菌株菌丝长势较好。对9个杂交菌株和2个亲本进行评价，最终筛选到1株菌丝体耐高温（40℃胁迫18 h仍可恢复生长）、生育期短（53 d，比亲本分别缩短12和20 d）、商品性状好（菌盖圆且规整，菌柄较短，耐储存）、营养成分含量较高（粗蛋白含量13.13 g/100 g，粗纤维含量17.93 g/100 g，氨基酸含量7.57 g/100 g）的杂交新菌株PGH6。【结论】通过单核体杂交育种获得了1株高产优质耐高温的杂交新菌株，为我国热区巨大侧耳菌株产业提供了新种质。

• 大球盖菇遗传多样性分析及常压室温等离子体诱变育种

  苏文英, 纪伟, 刘晓梅, 赵书光, 秦裕营, 任立凯,

  【目的】分析大球盖菇遗传多样性并通过常压室温等离子体诱变技术获得新菌株，为因地制宜选育适宜当地栽培品种及大球盖菇的开发利用提供理论参考。【方法】对10个大球盖菇菌株（编号为D1～D10）进行活化培养，测量其菌落直径，观察并记录菌丝均匀度、密度等长势情况，计算菌丝生长速率。通过随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术对10个菌株进行PCR检测，以RAPD遗传多样性聚类分析图分析不同菌株间的亲缘关系；筛选菌丝生长速率最快的菌株作为出发菌株（CK），对其原生质体进行诱变处理后，挑选与CK产生较明显拮抗现象的诱变菌株，测定诱变菌株不同继代菌丝生长速率，并对诱变菌株及CK进行RAPD-PCR检测。【结果】筛选获得菌丝生长速率最快（0.477 cm/d）的菌株D6，该菌株菌落边缘整齐，菌丝浓密，为CK。从6条谱带清晰、多态性较好引物中扩增出多态性比率为88.5%；当遗传相似性系数为0.73时，10株供试大球盖菇可分为三大类群；采用常压室温等离子体技术诱变大球盖菇菌株CK的原生质体，经筛选获得6株菌丝生长速率较快且与CK产生较明显拮抗现象的优势菌株。同一诱变菌株在不同继代过程中菌丝生长速率差异不明显，CK的菌丝生长速率最低，菌株D32的菌丝生长速率最高，且显著高于同一继代下的其他菌株（P<0.05）。遗传差异分析结果显示，6株优势菌株与CK间存在遗传差异，核苷酸序列较CK发生改变。【结论】10株大球盖菇菌株遗传基础较集中，筛选获得6株诱变效应明显且稳定的菌株，分别为D32、D36、D42、D73、D118和D133，可用于大球盖菇新品种选育研究。

• 基于SRAP分子标记和农艺性状的大球盖菇种质资源遗传多样性分析

  詹美蓉, 严胜泽, 罗情情, 王圣铕, 谢婷, 王爱琴, 陆欢, 王瑞娟,

  【目的】综合评价大球盖菇菌株的农艺性状及遗传多样性，筛选出适宜在福建三明地区栽培的优质菌株，为大球盖菇育种及其开发利用提供参考依据。【方法】通过ITS序列分析、拮抗试验及SRAP分子标记对收集的17株大球盖菇菌株进行遗传多样性分析，分别测定子实体长度、菌盖直径、菌盖厚度、菌柄上端直径、菌柄下端直径及单朵重等农艺性状后，采用相关分析和主成分分析对大球盖菇的农艺性状进行分析。【结果】ITS序列分析证实，17株供试菌株均为大球盖菇，在进化关系上分属于三大分支；拮抗试验结果表明，具有拮抗反应的培养组合共有87组，无拮抗反应的培养组合有49组，即大球盖菇菌株间存在较大差异性；17株大球盖菇菌株的遗传相似系数为0.66～0.92，遗传背景较丰富；当遗传相似系数为0.79时，17株大球盖菇菌株可分为六大类（I～VI）。不同农艺性状的遗传多样性指数（i>H'）均大于1.50，变异系数为14.29%～47.82%。其中，单朵重的变异系数最大（47.82%），产量的变异系数较小（14.29%），说明大球盖菇农艺性状存在丰富的变异，具有高的遗传多样性。相关分析发现，培养皿菌丝形态与培养皿菌丝生长速率呈显著负相关（r=-0.565）(P<0.05，下同)，与栽培袋菌丝形态、产量呈极显著正相关（r=0.772和r=0.664）(P<0.01，下同)；培养皿菌丝生长速率与产量呈显著负相关（r=-0.524）；栽培袋菌丝形态与产量呈极显著正相关（r=0.721）。主成分分析结果表明，第一主成分（PC1）的贡献率为50.768%，其特征向量较高的农艺性状是子实体长度和产量；第二主成分（PC2）的贡献率为38.729%，其特征向量较高的农艺性状是菌盖直径和菌柄上端直径。【结论】大球盖菇D-3菌株的菌丝生长均匀、浓密，生长速率较快，产量高且稳定，子实体菌柄粗壮，整体商品性好，可作为大球盖菇品种选育亲本，适宜在福建三明地区推广种植。

• 条盖靴耳的分离鉴定、生物学特性及驯化栽培

  潘美晨, 姚依岚, 代月婷, 周斌, 李长田,

  【目的】对一株野生条盖靴耳菌株PMC666进行分离鉴定和生物学特性分析，并进行驯化栽培，为靴耳属食用菌的资源开发及利用提供理论依据。【方法】从吉林农业大学校园采集一株野生靴耳菌株PMC666，通过形态学观察和分子序列比对其进行物种鉴定，并利用单因素试验和正交试验优化菌丝生长条件，开展人工驯化栽培试验。【结果】野生菌株PMC666子实体呈贝壳状，菌盖直径1.5～2.5 cm，幼时为白色，而后逐渐变为淡肉粉色，边缘有明显条纹；菌肉白色，极薄，菌褶延生，幼时白色，而后逐渐变为土褐色；菌柄极小极短，实心；孢子印为棕褐色，上述形态学特征支持该菌株为条盖靴耳。野生菌株PMC666的ITS序列与选取的条盖靴耳模式标本序列相似度≥99.50%，并在系统发育进化树上形成同一谱系，支持该菌株为条盖靴耳。正交试验优化得到该菌株生长的最适碳源为麦芽糖，最适氮源为酵母浸粉，最适pH为7.0，最适温度为25℃。选用粗木屑78%、麦麸20%、石灰1%、石膏1%为基质配方，含水量控制在65%左右，可成功出菇，发菌期为65～70 d。在（25±2）℃条件下，环境湿度控制在60%～80%，给予适当的散射光刺激，30～35 d后可形成原基。在子实体生长阶段，适当提高湿度至85%～90%，经过7～10 d，子实体可长至成熟并采收，最终的生物学效率为6.2%。【结论】条盖靴耳菌株PMC666为中温型菌株，可进行人工栽培，适宜在温带和亚热带气候地区的春、秋季栽培。管理时需特别注意温湿度控制、光照条件、通风、病虫害防治及基质的营养和卫生，以确保高产稳产。

• 野生紫芝生物学特性及驯化栽培

  胡佳, 戴丹, 王振, 孙鹏, 戴建成, 彭新红, 陈绪涛, 魏云辉,

  【目的】对野生紫芝开展生物学特性和驯化栽培研究，以期为紫芝种质资源评价和高效利用提供参考依据。【方法】采用组织分离法对采集自江西省吉安市安福县的1份野生紫芝子实体进行分离获得纯培养菌株；通过子实体形态特征结合ITS序列分析鉴定菌株。以菌株为试验材料，分别从碳源、氮源、pH和温度4个因素开展生物学特性研究，并在单因素试验基础上选择3个较优水平进行4因素3水平正交试验，筛选菌丝生长的最适条件。通过极差和方差分析，比较4个因素对菌株菌丝生长的影响程度。通过驯化栽培出芝，测定其子实体产量和生物学效率；通过分光光度法对栽培子实体总三萜和粗多糖含量进行测定。【结果】通过形态学观察结合分子生物学鉴定结果，判定供试菌株为紫芝（Ganoderma sinense），编号G46。单因素试验结果表明，菌株G46的最佳碳源为果糖和可溶性淀粉、最佳氮源为酵母浸粉、最适pH为6.0，最适温度为25℃。正交试验结果表明，在以果糖为碳源、牛肉膏为氮源、pH为7.0、温度为25℃的条件下菌株G46菌丝生长最佳。极差和方差分析结果显示，4个因素对菌株G46菌丝生长的影响程度为碳源>温度>pH>氮源。驯化栽培试验结果表明，栽培袋菌丝48 d左右满袋，平均生长速率为4.17 mm/d,15 d左右形成原基，23～28 d子实体成熟。单个子实体平均鲜重为52.13 g、生物学效率为5.21%。栽培出芝的子实体总三萜和粗多糖含量分别为0.98%和1.30%。【结论】采集的野生紫芝培养基营养源广泛易得，对环境适应性较强，容易驯化栽培出芝，其子实体中总三萜和粗多糖含量较高，可作为紫芝优异菌种选育材料，具有较大的开发潜力。

• 不同栽培条件对榆黄蘑生理特性及其多糖含量的影响

  巫桂芬, 杨愿球, 谭凤连, 朱静瑜,

  【目的】分析不同栽培条件对榆黄蘑生理特性及子实体多糖含量的影响，为榆黄蘑的栽培及多糖提取提供理论参考。【方法】以榆黄蘑种质平顶8-31为材料，对其进行单一组分栽培料（玉米芯、木屑、稻草）处理和不同光照（白光、紫光、暗处理、红光、蓝光）处理，以混合配方和自然光为对照（CK1和CK2），并采用热水浸提法提取榆黄蘑子实体多糖，利用苯酚—硫酸法测定其多糖含量，分析不同栽培料处理和不同光照处理对榆黄蘑生理特性及多糖含量的影响。【结果】不同栽培料处理的榆黄蘑总产量和生物学效率排序均为CK1>木屑>玉米芯>稻草；粗多糖提取率排序为玉米芯（8.64%）=木屑（8.64%）>稻草（8.52%）>CK1(8.00%)，多糖含量排序为玉米芯（0.216 mg/mL）=木屑（0.216 mg/mL）>稻草（0.213 mg/mL）>CK1(0.200 mg/mL)，不同栽培料处理下榆黄蘑子实体均为淡黄色。不同光照处理的榆黄蘑总产量和生物学效率排序均为CK2>蓝光处理组>紫光处理组>白光处理组>暗处理组>红光处理组，粗多糖提取率排序为红光处理组（10.80%）>白光处理组（8.24%）>CK2(8.20%)>蓝光处理组（8.16%）>暗处理组（7.48%）>紫光处理组（6.72%），多糖含量排序为红光处理组（0.270 mg/mL）>白光处理组（0.206 mg/mL）>CK2(0.205 mg/mL)>蓝光处理组（0.204 mg/mL）>暗处理组（0.187mg/mL）>紫光处理组（0.168 mg/mL），蓝光处理的子实体为黄色，白光和紫光处理的子实体为淡黄色，红光和暗处理的子实体为白色。不同榆黄蘑子实体部位的粗多糖提取率排序为菌柄>菌盖>菌座；多糖含量的排序为菌柄（0.362 mg/mL）>菌盖（0.235 mg/mL）>菌座（0.200 mg/mL）。【结论】不同栽培料对榆黄蘑子实体颜色无明显影响，不同光照处理影响榆黄蘑子实体颜色。不同栽培料和光照处理均影响榆黄蘑生理特性及其多糖含量，配制营养成分全面的栽培料可提高榆黄蘑的产量，单一组分（玉米芯、木屑）栽培料或红光照射对榆黄蘑多糖合成和积累具有积极的促进作用。

• 榆黄蘑木霉病病原菌分离鉴定及植物源抑菌剂筛选

  刘婷婷, 付旭娟, 黄梅, 郭冬琴,

  【目的】明确榆黄蘑木霉病的病原菌种类，筛选有效的植物源抑菌剂，为榆黄蘑木霉病的科学诊断和田间防治提供理论依据。【方法】从重庆市万州区龙驹镇灯台村智富森华农业专业合作社大棚食用菌栽培基地采集榆黄蘑染病菌包，采用组织分离法对榆黄蘑染病菌包中的病原菌进行分离，通过形态学特征和分子生物学方法对病原菌进行种类鉴定。选取32种常见药用植物通过醇溶液提取获得提取液；采用菌丝生长速率法测定不同药用植物提取液对病原菌菌丝生长的影响；通过最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）确定药用植物提取液的最佳使用浓度；通过孢子萌发试验评估药用植物提取液对病原菌的抑制效果。【结果】从榆黄蘑染病菌包中共分离出2株木霉菌，通过形态学特征和分子生物学方法鉴定为长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）和深绿木霉（Trichoderma atroviride）。抑菌试验发现，黄连和甘草提取液对长枝木霉的抑制效果较佳，平均菌丝生长抑制率分别为94.54%和81.90%,MIC均为15.60 mg/mL,MBC均为31.25 mg/mL，孢子萌发抑制率最高分别达97.73%和96.95%，抑制中浓度(EC50)分别为1.0670和2.2260 mg/mL；黄连提取液对深绿木霉的综合效果最佳，平均菌丝生长抑制率为65.82%,MIC为250.00 mg/mL，孢子萌发抑制率达89.21%,EC50为34.1080 mg/mL。【结论】长枝木霉和深绿木霉是污染榆黄蘑的主要病原菌。黄连和甘草提取液对2种木霉菌均有较好的抑制效果，可作为植物源抑菌剂在食用菌种植中推广应用。

• 基于隶属函数法对不同基质配方下平菇生长和品质的综合评价

  周春衡, 王文林, 张雯龙, 宋海云, 谭秋锦, 韦媛荣, 郑树芳,

  【目的】研究不同基质配方对平菇生长和品质的影响并进行综合评价，为筛选适合平菇生长可替代木屑的原料及平菇产业的高质量发展提供参考依据。【方法】以和平2号平菇为试验材料，澳洲坚果果皮、甘蔗渣等作为栽培原料，设置不同基质配方处理，分别标记为T1、T2、T3、T4，配方中不添加澳洲坚果果皮为对照（CK），测定不同基质配方处理下平菇菌丝生长速率、单包产量、农艺性状指标及各营养物质含量，分析平菇生长指标与品质指标间的相关性，并利用隶属函数法对不同基质配方下平菇生长和品质进行综合评价。【结果】不同基质配方处理平菇菌丝生长速率为9.41～9.92mm/d，表现为CK>T2>T4>T3>T1。CK平菇菌丝生长速率分别较T1、T2、T3和T4高5.14%、1.11%、3.43%、2.62%。T2处理下平菇单菇重和菌盖横径2个农艺性状指标均为最高值，其中，在单菇重方面，T2处理与CK、T1和T3处理相比无显著差异（P>0.05），但显著高于T4处理（P<0.05，下同），增加幅度为38.49%;T2处理下的平菇菌盖横径较其他处理高3.24%～51.88%，且与CK的差异达显著水平。2个潮次不同基质配方下平菇总单包产量排序为T2>T1>T3>T4>CK。T4处理下平菇蛋白质和总氨基酸含量显著高于其他处理，T2处理下平菇的硒含量最高（0.40 g/100 g）。单菇重与菌柄直径和菌盖厚度均呈极显著正相关（P<0.01，下同），相关系数分别为0.75和0.74；菌丝生长速率与粗多糖含量呈极显著正相关，相关系数为0.66。通过隶属函数法对不同基质配方下平菇生长和品质进行评价，排序为T2(0.78)>T4(0.54)>T1(0.52)>T3(0.45)>CK(0.41)。【结论】澳洲坚果果皮作为栽培基质减缓了平菇的菌丝生长速率，提高了平菇单包产量和蛋白质等营养物质含量。在培养基质配方中添加30%的澳洲坚果果皮和35%的甘蔗渣，平菇生长和品质的综合表现最好。

• 基于响应面法优化滑菇液体菌种发酵培养基配方

  陈珣, 肇莹, 龚娜, 刘国丽, 马晓颖, 张敏, 肖军,

  【目的】基于响应面法探究不同碳源、氮源、无机盐种类及浓度对滑菇液体菌种生产的影响，为寻找最适滑菇菌种生长的配方，缩短滑菇生产周期，降低生产成本及促进滑菇规模化生产提供理论依据。【方法】以滑菇菌株滑99为研究对象，基础培养基为空白对照（CK），选取5种碳源（玉米粉、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉和甘露醇），5种氮源（黄豆粉、牛肉膏、酵母浸粉、蛋白胨和酒石酸钠）及5种无机盐（硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锰和氯化钙）作为配方筛选因子，利用单因素试验筛选最适碳源、氮源和无机盐种类，设不同浓度梯度筛选最佳碳源、氮源、无机盐的浓度，采用响应面法优化滑菇液体菌种发酵培养基配方并进行验证。【结果】玉米粉作为碳源时，滑菇菌种的菌球数（70个）和菌丝生长速率（1.471 cm/d）均显著高于CK和其他碳源（P<0.05，下同）；黄豆粉作为氮源时，菌丝生物量最高（6.200 g/L）；硫酸镁作为无机盐时，滑菇菌丝生长速率最高（0.638 cm/d），菌丝生物量最高（3.102 g/L）。玉米粉、黄豆粉和硫酸镁分别为滑菇液体菌种培养的最佳碳源、氮源和无机盐；单因素试验结果显示，最适滑菇菌种生长的玉米粉、黄豆粉和硫酸镁浓度分别为30、20和3 g/L。以玉米粉（A）、黄豆粉（B）、硫酸镁（C）为因变量，以菌丝生物量作为响应值（Y），建立二次多项回归方程：Y=15.448+1.531A+1.739B-0.063C+0.312AB+0.223AC-0.914BC-0.176A2-3.139B2-1.046C2，根据F值，确定各因素对滑菇菌种菌丝生物量影响大小的排序为黄豆粉（B）>玉米粉（A）>硫酸镁（C）；黄豆粉与硫酸镁（BC）之间的交互作用明显。配方验证试验结果显示，菌丝体生物量实测值为17.223 g/L，与理论值17.143 g/L基本相符。【结论】利用响应面法优化滑菇液体菌种发酵培养基配方为玉米粉30 g/L+黄豆粉16.67 g/L+硫酸镁2.93 g/L，且该优化配方有效可行。

• 不同栽培基质桑园套种长裙竹荪的营养组分及经济效益分析

  刘筱雪, 王一, 李冬兵, 杨敬, 兰凤杰, 王洪江, 曾泽彬,

  【目的】分析不同栽培基质桑园套种长裙竹荪的营养组分及经济效益差异，为拓宽长裙竹荪栽培原料来源以及桑园套种长裙竹荪技术的推广应用提供参考。【方法】以竹屑、桑枝和玉米芯为栽培基质，采用桑园套种长裙竹荪的模式进行栽培试验，对长裙竹荪产量、生物学效率、农艺性状、营养组分及经济效益等进行比较分析。【结果】竹屑栽培的长裙竹荪产量最高，为2897.55 kg/ha；子实体多糖含量最高，达2.080 g/100 g；利润率和投入产出比最高，分别为190.52%和1∶2.91；但其苦味氨基酸占比最高，为39.877%。桑枝栽培的长裙竹荪子实体具有高蛋白质、高氨基酸和高生物活性物质（粗纤维、多酚、总黄酮、维生素B2）的特点，氨基酸比值系数分（SRC）为59.10、必需氨基酸指数（EAAI）为59.69、生物价（BV）为53.36、营养指数（NI）为10.29，其蛋白质更均衡、营养价值更高；竹荪产量为2817.75 kg/ha，利润率和投入产出比分别为146.99%和1∶2.47。玉米芯栽培的长裙竹荪子实体三萜含量最高，为0.409%，鲜味氨基酸和甜味氨基酸占比最高，分别为27.143%和30.666%，但其成本最高，为65250元/ha，竹荪产量最低，为1598.85 kg/ha。【结论】利用桑枝栽培长裙竹荪的产量与利用竹屑栽培相当，且营养价值更高，桑枝可以作为长裙竹荪的主要栽培基质。在桑园套种长裙竹荪产量高、经济效益好，是一项值得推广的绿色高效栽培技术。

• 17种楠属植物叶绿体基因组密码子偏好性分析

  朱恒星, 戴前莉, 魏卓, 卢敏, 黄飞逸, 陈本文,

  【目的】解析樟科（Lauraceae）楠属（Phoebe）植物叶绿体基因组密码子偏好性，为楠属植物系统发育关系及遗传多样性研究提供理论依据。【方法】以17种楠属植物叶绿体基因组为研究对象，利用Genious 8.1.3、EMBOSS explorer的CUSP和CodonW模块等对叶绿体基因组的蛋白编码序列（CDS）进行密码子偏好性、中性绘图、ENC-plot绘图、PR2-plot绘图和最优密码子分析，确定最优密码子并探讨楠属植物密码子偏好性形成的主要影响因素。【结果】17种楠属植物共筛选出52～56条CDS,GC含量为39.64%～39.94%，密码子第1、2、3位GC含量（GC1、GC2、GC3）表现为GC1(47.30%～47.93%)>GC2(39.50%～39.81%)>GC3(31.97%～32.12%),GC3更趋向于A/U；有效密码子数（ENC）为50.948～51.148；同义密码子数均为31个，其中以A/U结尾的有25个；中性绘图分析结果显示第1、2位密码子GC含量平均值（GC12）为34.74%～54.97%,GC3为22.44%～46.77%，回归系数为-0.0422～-0.0101;ENC-plot绘图分析结果显示大部分基因散点分布在ENC预期标准曲线附近，少部分与标准曲线离散程度大；PR2-plot分析图右下方的基因分布较多，密码子第3位碱基的使用偏好T和G；共有5个最优密码子，分别为亮氨酸的CUU、甘氨酸的GGA、酪氨酸的UAU、天冬酰胺的AAU和丝氨酸的UCC。此外，基于相对同义密码子使用度（RSCU）和CDS序列构建系统发育进化树，2种方法构建的物种进化关系存在差异，基于CDS序列构建的系统发育关系更符合楠属物种进化分类。【结论】楠属植物叶绿体基因组密码子偏好性较弱，偏好使用A/U结尾的密码子，自然选择可能是主要因素，受突变或其他因素的影响较小。楠属植物进化过程中，叶绿体基因组非编码区序列同样承载重要信息。

• 叶面喷施褪黑素对NaCl胁迫下南瓜幼苗生长和生理的调控作用

  党建成, 姜艳芳, 张红磊, 王亚楠, 张凯, 刘泽发,

  【目的】探究不同浓度褪黑素对氯化钠（NaCl）胁迫下南瓜幼苗生长和生理特性的影响，为利用褪黑素提高南瓜幼苗的耐盐性提供理论依据。【方法】以南瓜杂交种银板栗为试验材料，采用盆栽试验，待南瓜幼苗长至3叶1心时以浇灌浓度为150 mmol/L NaCl模拟盐胁迫环境，设5个褪黑素喷施浓度处理，分别为10.0 μmol/L（T1）、20.0 μmol/L（T2）、50.0 μmol/L（T3）、100.0 μmol/L（T4）和150.0 μmol/L（T5）；另设2个对照，分别为NaCl胁迫后不喷施褪黑素处理（CK）和非NaCl胁迫的清水浇灌处理（CK0）。盐胁迫当天于夜间无光照时间段开始喷施褪黑素溶液，之后每隔1 d喷施1次，分别于处理后0、6、12和18 d测定南瓜幼苗生长指标，处理后18 d测定光合指标、叶绿素含量、根长、根系活力及抗氧化系统指标。【结果】NaCl胁迫影响南瓜幼苗植株正常生长发育，经褪黑素处理后幼苗生长效果有不同程度的提升，其中，处理后18 d,T3处理南瓜幼苗的株高、茎粗、总叶绿素含量、根系活力、过氧化氢酶（CAT）活性提升效果最佳，分别较CK显著增加41.71%、41.08%、83.39%、46.77%和160.00%（P<0.05），鲜重、干重、干鲜比、超氧化物歧化酶（SOD）活性也有所提高，丙二醛（MDA）含量有所降低；与CK相比，低浓度褪黑素处理（T1和T2）对光合指标有改善作用，而高浓度褪黑素处理（T3、T4和T5）的南瓜叶片光合速率（Pn）低于CK。主成分分析结果表明，不同处理的主成分综合得分排名依次为CK0>T3>T4>T2>T1>T5>CK。【结论】叶面喷施适宜浓度的褪黑素可有效缓解NaCl胁迫对南瓜幼苗的损害，提高南瓜幼苗的耐盐性。综合南瓜幼苗生长和生理指标表现，以喷施50 μmol/L褪黑素对缓解南瓜幼苗NaCl胁迫伤害的作用较佳。

• 施钙量对白菜生长和钙转运关键基因家族ACA表达的影响

  杨艳林, 卢一铭, 徐卫红,

  【目的】探究施钙量对白菜生长和钙转运关键基因家族ACA表达的影响，了解白菜钙吸收、转运和富集的分子调控机制，为进一步开展富钙白菜新品种选育及栽培中钙肥合理施用提供理论基础。【方法】采用黑叶五月慢和上海六月慢2个白菜品种进行盆栽试验，设0、0.2、0.4、0.6和0.8 g/kg施钙量处理，以0 g/kg为对照，测定白菜地上部和根系生物量、钙含量及钙积累量，选取对照和0.8 g/kg施钙量处理白菜叶片进行转录组测序，筛选差异表达基因（DEGs）并进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析，通过实时荧光定量PCR验证施钙量对ACA基因家族表达的影响。【结果】随着施钙量的增加，黑叶五月慢和上海六月慢地上部和根系干重、钙含量均呈先升高后降低的变化趋势，2个白菜品种地上部和根系干重、钙含量分别在0.4、0.6 g/kg施钙量处理下达最大值且显著高于对照（P<0.05，下同）；2个白菜品种地上部钙积累量随着施钙量的增加均呈先升高后降低的变化趋势，而根系钙积累量整体呈升高趋势。0.8 g/kg施钙量处理与对照黑叶五月慢间存在87个DEGs,0.8 g/kg施钙量处理与对照上海六月慢间存在176个DEGs,DEGs主要注释到细胞过程、代谢过程、结合、催化活性等GO功能条目，显著富集到酪氨酸代谢、硫代葡萄糖苷生物合成、植物激素信号传导等KEGG信号通路。从DEGs中鉴定出25个ACA基因家族成员。实时荧光定量PCR检测结果表明，0.6和0.8 g/kg施钙量处理下2个白菜品种ACA4-4和ACA10-1基因相对表达量均较对照显著上调，黑叶五月慢ACA11-2基因相对表达量在0.6 g/kg施钙量处理下较对照显著上调。对白菜ACA基因相对表达量与钙含量进行相关分析发现，ACA4-4、ACA10-1和ACA11-2基因相对表达量与白菜钙含量均呈正相关，其中ACA4-4基因相对表达量与白菜钙含量相关性达显著水平。【结论】适量施钙可显著提高白菜地上部和根系干重及钙含量。筛选出钙转运关键基因ACA4-4、ACA10-1和ACA11-2，推测ACA基因家族成员在白菜钙转运和积累中具有重要作用。

• 高益生活性桑叶低聚糖的制备工艺优化及功能研究

  钟文豪, 黎尔纳, 杨琼, 邹宇晓, 钟赛意, 周东来, 廖森泰,

  【目的】优化桑叶低聚糖促鼠李糖乳杆菌GG(LGG)增殖的制备工艺，分析其对LGG产短链脂肪酸的影响，为桑叶低聚糖的开发利用提供科学参考。【方法】以桑叶低聚糖促LGG增殖率为评价指标，采用酶解法制备桑叶低聚糖，筛选出最适水解酶，然后通过单因素试验和响应面试验优化酶解工艺，最后采用气相色谱法分析桑叶低聚糖对LGG脂肪酸代谢产物的影响。【结果】β-葡聚糖酶酶解制备的桑叶低聚糖促增殖效果最佳，采用响应面法优化得到最佳制备工艺：酶添加量1500 U/mL、酶解温度51℃、酶解时间4 h，在此工艺下制备得到的桑叶低聚糖促LGG增殖率为253.16%，与理论预测值（244.80%）接近，促增殖效果优于同质量浓度的桑叶多糖和商品化低聚糖（低聚半乳糖和低聚异麦芽糖）；各因素对LGG增殖率的影响排序为酶解温度（B）>酶添加量（A）>酶解时间（C），两因素间交互作用对LGG增殖率的影响排序为AC>AB>BC,AC和AB的交互作用对LGG增殖率均有显著影响（P<0.05，下同），BC的交互作用无显著影响（P>0.05）。采用凝胶渗透色谱法测定桑叶低聚糖分子量为1900 Da，桑叶低聚糖能显著提高LGG产乙酸、丙酸、丁酸和戊酸等短链脂肪酸能力，较对照组（未添加多糖或低聚糖）分别提高207%、39%、17%和10%。【结论】酶解法制备得到的桑叶低聚糖具有高益生活性，能显著提高LGG产短链脂肪酸能力，具有良好的应用前景。

• 玉米植物基酸奶制备工艺优化

  刘瑾萱, 张雅媛, 付红岩, 王颖, 李春梅,

  【目的】优化玉米植物基酸奶的制备工艺，并对其进行品质评价，为促进微胚乳玉米产业多元化发展和植物基酸奶研究提供参考依据。【方法】以高油高蛋白微胚乳玉米华健1号为主要原料，以发酵性能和感官评分为评价指标，筛选适宜的市售直投式混合酸奶发酵剂，再通过单因素试验和响应面试验优化玉米植物基酸奶制备工艺，对优化后的酸奶进行品质分析，并与市售大豆基酸奶和牛乳酸奶的质构特性及持水力进行对比。【结果】市售酸奶发酵剂E产酸能力适中，发酵的酸奶香气浓郁、酸甜比适宜、组织状态细腻，适用于玉米植物基酸奶的发酵。建立以大豆分离蛋白添加量（A）、糖添加量（B）、发酵剂接种量（C）和发酵时间（D）4个因素为自变量的感官评分（Y）二次多项回归模型：Y=88.02-4A+2.12B-2.13C+1.3D-1.3AB-0.3AC+2.5AD-0.825BC+0.775BD+0.275CD-6.48A2-5.13B2-3.96C2-3.03D2。4个因素对玉米植物基酸奶感官评分的影响排序为大豆分离蛋白添加量>发酵剂接种量>糖添加量>发酵时间；其中，4个因素及大豆分离蛋白添加量与发酵时间的交互作用对玉米植物基酸奶感官评分具有极显著影响（P<0.01），大豆分离蛋白添加量与糖添加量交互作用具有显著影响（P<0.05，下同）。玉米植物基酸奶的最佳制备工艺条件：以玉米浆总质量计，大豆分离蛋白添加量2.4%、糖添加量6.3%、发酵剂接种量0.26%、发酵时间4.2 h，在此工艺条件下制作的玉米植物基酸奶色泽均匀、口感细腻、酸甜适宜，感官评分为89.1分，与预测值接近；其蛋白质含量（2.40 g/100 g）、酸度（66.0°T）、pH（4.31）和乳酸菌总数（8.8×107 CFU/g）均达团体标准T/WSJD12—2020《植物蛋白饮料植物酸奶》的要求，脂肪含量适宜，为1.70 g/100 g；持水力为63.77%，显著高于市售大豆基酸奶和牛乳酸奶；质构特性与大豆基酸奶无显著差异（P>0.05），整体评价高于牛乳酸奶。【结论】通过响应面法优化制备的玉米植物基酸奶酸甜适宜、口感细腻顺滑、色泽均匀，具有发酵香味，玉米香气浓郁。该研究结果可为微胚乳玉米的开发利用提供新的思路和方向，同时丰富植物基酸奶产品种类。

• 不同采后浸泡方式对豇豆农药残留的去除效果

  黄婵婵, 陈羽烨, 李冬桂, 陆覃昱, 姚金洁, 陈壮美, 谢晋, 丁孝宇, 吕丽兰,

  【目的】研究不同采后浸泡方式对豇豆中农药残留去除效果的影响，为豇豆质量安全风险管理及膳食风险评估提供理论基础。【方法】以田间喷施毒死蜱、水胺硫磷、氧乐果和丁硫克百威的豇豆为研究对象，分别于喷药后第1、3、5和14 d进行采摘，然后采用常温清水、冰水和1%冰碱水均分别浸泡5、10和15 min的方式进行处理，以未经浸泡处理为对照，对豇豆中毒死蜱、氧乐果、丁硫克百威和水胺硫磷残留量进行检测，分析不同采后浸泡方式对豇豆中农药残留的去除效果。【结果】通过清水、冰水和1%冰碱水浸泡豇豆均能在一定程度上降低毒死蜱、氧乐果、丁硫克百威和水胺硫磷的残留量；其中，喷施丁硫克百威和水胺硫磷后第5 d采摘于1%冰碱水浸泡15 min的洗脱效果最佳，去除率分别为69.37%和49.67%；喷施毒死蜱后第5 d采摘于1%冰碱水浸泡10 min的洗脱效果最佳，去除率为44.94%；喷施氧乐果后第1 d采摘于1%冰碱水浸泡5 min的洗脱效果最佳，去除率为53.83%。喷药后第5 d，经3种浸泡方式处理的豇豆仅丁硫克百威的最大农药残留量符合国家限量值标准（≤0.01 mg/kg）。【结论】毒死蜱、氧乐果和水胺硫磷在喷药5 d内，通过常温清水、冰水和1%冰碱水浸泡方式均无法达到国家限量标准，我国实行高毒农药在豇豆中的禁限用十分必要。

• 基于全基因组重测序的海南黄牛群体遗传多样性分析及热适应相关候选基因筛选

  吴慧, 李世元, 蒋俊明, 王欢, 吴官胜, 李连彬, 陈巧玲, 杜丽, 王凤阳, 陈思,

  【目的】基于全基因组重测序分析海南黄牛群体遗传多样性并筛选热适应相关候选基因，为我国地方家牛种质资源的保护与开发利用提供理论参考。【方法】使用FASTP v0.20.0对海南黄牛、蒙古牛和藏牛的全基因组数据进行质量控制和过滤，BWA进行序列比对，GATK v3.5-0-g36282e4进行变异检测，ANNOVARDocumentation构建注释所需的数据库。基于常染色体SNP位点信息，利用MEGA X构建系统发育进化树，通过EIGENSOFT v7.2.1进行主成分分析（PCA）并进行均匀流形近似和投影（UMAP）聚类，使用Structure v2.3.4进行群体结构分析并通过计算核苷酸多样性及连锁不平衡衰减来探究群体遗传多样性。通过PopGenome对全基因组进行扫描，使用核苷酸多样性比值（θπ）和核苷酸多样性及群体间遗传分化系数（FST）筛选海南黄牛基因组中受正向选择的候选区域，并将注释到的基因通过DAVID进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析，挑选与热适应相关的基因，并预测其编码蛋白的结构和理化性质。【结果】经质控后共检测出20075403个高质量常染色体SNP位点。海南黄牛、蒙古牛和藏牛群体不存在血统混杂现象。相较于蒙古牛和藏牛，海南黄牛连锁不平衡衰减速度更快，核苷酸多样性更高，受人工选择强度较低且具有较高的群体遗传多样性。以蒙古牛和藏牛为参考群体，在海南黄牛中共筛选出144个受正向选择的基因。在海南黄牛群体中存在磷酸肌醇3激酶调节亚基5(PIK3R5)基因的错义突变（AC＿000176.1:28979868,c.987C>A,p.331D>Y），该突变能引起PIK3R5基因mRNA二级结构和PIK3R5蛋白二级结构的改变。【结论】海南黄牛较高的遗传多样性和较低的人工选择强度表明其在热带环境中保留了丰富的遗传变异。海南黄牛PIK3R5基因存在错义突变，可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响热应激响应和代谢调节，从而增强其热适应能力。

• 干扰STAT1基因表达对狂犬病病毒感染的影响

  栗朵朵, 蔡宗伶, 张宏燕, 李晓宁, 罗廷荣,

  【目的】探讨信号转导和转录激活因子1(STAT1)在狂犬病病毒（RABV）感染过程中的作用机制，为后续STAT1功能研究提供理论依据。【方法】以RABV感染小鼠小脑星形胶质细胞（C8-D1A），于接毒后12、24和48 h分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测病毒基因及宿主细胞STAT1和细胞因子的表达变化；针对STAT1基因靶序列设计合成不同的siRNA序列，通过脂质体法瞬时转染C8-D1A细胞，筛选出干扰效率较高的STAT1-siRNA序列；然后以筛选出的STAT1-siRNA序列转染C8-D1A细胞，转染24h后接种0.1MOI的RABV，分别从转录水平和蛋白水平检测干扰STAT1基因表达对RABV复制及细胞因子表达的影响。【结果】RABV感染C8-D1A细胞后能引起STAT1蛋白的表达大幅度上升；无论是弱毒株rRC-HL还是标准强毒株CVS-11感染，都能引起C8-D1A细胞内IFN-α、IFN-β、TNF-α和IL-6等细胞因子基因上调表达。经STAT1-siRNA干扰效果验证，发现在最高浓度200 nmol/L下作用24 h后，STAT1-1616的干扰效率为81%、STAT1-2271的干扰效率为82%，干扰效果达极显著水平（P<0.01）；作用48h后，STAT1-1616的干扰效率为83%,STAT1-2271的干扰效率为75%，干扰效果达显著水平（P<0.05），故选择这2对STAT1-siRNA进行后续试验。干扰STAT1基因表达后，无论是接种弱毒株rRC-HL还是接种标准强毒株CVS-11，其N和P基因的表达均呈上调趋势，病毒N、P蛋白在接毒后24和36 h均呈上调表达趋势，说明干扰STAT1基因表达有利于上调病毒蛋白合成，而促进RABV复制；但干扰STAT1基因表达对RABV感染引起宿主细胞产生IFN-α、IFN-β、TNF-α和IL-6等细胞因子无显著影响（P>0.05）。【结论】合成的2对STAT1-siRNA序列（STAT1-1616和STAT1-2271）对C8-D1A细胞的STAT1基因有显著干扰效果。干扰STAT1基因表达有利于上调病毒蛋白合成，而促进RABV复制。

• 广西内陆水域外来鱼类的种类及分布特征

  刘昊, 吴志强, 乔梁, 黄亮亮, 何佳洋, 孙扬言, 李育森,

  【目的】明确现阶段广西内陆水域外来鱼类的种类组成，并从各水系相似性和差异性分析其分布特征，为广西外来鱼类入侵防控提供科学依据。【方法】以广西内陆水域为研究区域，在主要水系设34个采样点，于2023年2月（春季）、2023年5—6月（夏季）、2023年8—9月（秋季）及2023年11—12月（冬季）连续4个季度以渔船捕捞方式采集外来鱼类样本，然后通过Jaccard相似系数（Jsc）分析不同水系外来鱼类分布相似性，并以主坐标分析（PCoA）和置换多元方差分析（PERMANOVA）探讨不同水系外来鱼类分布差异。【结果】在广西内陆水域34个采样点共采集到外来鱼类7690尾，隶属于7目13科20属23种。其中，鲈形目数量最多（9种），占39.13%；以水产养殖为目的引种外来鱼类19种，占82.61%；来自亚洲和北美洲的外来鱼类各7种，分别占30.43%。从广西内陆水域各水系外来鱼类分布情况来看，红水河的外来鱼类数量最多（16种），南盘江外来鱼类物种数最少（7种）；分布样点范围最广的外来鱼类是尼罗罗非鱼和齐氏罗非鱼，分布范围占比均为97.06%；出现频次最高的是齐氏罗非鱼，为89.71%。基于Jsc的外来鱼类分布相似级别判定结果显示，极相似的水系有浔江—黔江（Jsc=0.93）、浔江—右江（Jsc=0.93）、红水河—黔江（Jsc=0.81）和红水河—浔江（Jsc=0.76），极不相似的水系为南盘江—贺江（Jsc=0.23）；PCoA分析结果显示，浔江、黔江、柳江、贺江、南盘江、邕江郁江和右江之间有明显分离。【结论】在广西内陆水域共采集到23种外来鱼类，多为水产养殖引种鱼类，分布特征上表现为干流外来鱼类物种多、支流外来鱼类物种少。广西内陆水域各水系外来鱼类物种组成存在相似之处，齐氏罗非鱼、尼罗罗非鱼、伽利略罗非鱼和革胡子鲇已广泛分布。因此，亟待进一步加强对外来引种鱼类的养殖管理，避免新引入外来鱼类的逃逸及已逃逸外来养殖鱼类的扩散。

• LM-Exos对巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用

  焦健, 李能秀, 左雨霏, 马忠梅, 常意行, 张石磊, 孟庆玲, 才学鹏, 乔军,

  【目的】分离感染单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）RAW264.7巨噬细胞分泌的外泌体（Exosomes,Exos），探究其对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用及机制，为揭示LM感染、胞内生存及免疫逃逸机制提供理论参考。【方法】通过差异超速离心法结合分子排阻法提取感染LM后RAW264.7巨噬细胞外泌体（LM-Exos），利用透射电子显微镜、粒径分析仪和Western blotting鉴定LM-Exo表型。通过实时荧光定量PCR、细胞活力检测和ELISA等方法分析不同剂量LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用。【结果】LM-Exos具有双层膜结构类圆形的小囊泡，直径约为60～80nm。Westernblotting检测结果显示，LM-Exos表面含有CD9、CD63、TSG101特异性标记蛋白。LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞形态和功能的影响具有明显的浓度依赖性，随着LM-Exos刺激时间延长，细胞形态由圆形逐渐分化为长梭形，并伸出不同形态的伪足。实时荧光定量PCR结果显示，随着LM-Exos刺激浓度的增加，IL-1β、IL-10、IL-6和TNF-α基因相对表达量均呈升高趋势。高浓度LM-Exos刺激后，RAW264.7巨噬细胞活力略有下降但抗LM EGD-e能力增强。与低浓度LM-Exos刺激相比，高浓度LM-Exos刺激显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）提高了CD8+T淋巴细胞TNF-α和IL-10相对分泌水平，并诱导了CD8+T细胞形态变化及凋亡水平升高。【结论】不同剂量的LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞表现出不同的调控作用。LM-Exos能增强RAW264.7巨噬细胞抗LM EGD-e能力，同时也能诱导CD8+T淋巴细胞分化和凋亡。LM-Exos可以作为免疫激活剂，增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能，高剂量的LM-Exos可能会通过诱导T细胞凋亡来减弱机体的免疫应答，进而实现LM免疫逃逸，这种双重作用可能是LM在感染过程中实现免疫逃逸的重要机制。

• 高温应激对大口黑鲈crh及其受体基因表达和皮质醇浓度的影响

  李铭, 杜金星, 宋红梅, 朱涛, 雷彩霞, 吴广州, 李胜杰,

  【目的】明确急性高温应激对大口黑鲈促肾上腺皮质激素释放激素基因（crh）及其受体基因（crhr1和crhr2）表达和皮质醇浓度的影响，深入分析crh、crhr1和crhr2基因与皮质醇间的作用关系，为揭示大口黑鲈应激反应的分子调控机制打下基础。【方法】通过PCR扩增大口黑鲈crh、crhr1和crhr2基因开放阅读框（ORF），采用实时荧光定量PCR检测这3种基因在大口黑鲈不同组织中的表达分布；对大口黑鲈进行急性高温应激胁迫后分别采集血样及脑组织，以25.0℃为初始水温设为对照（CK），测定不同时间点大口黑鲈脑组织中的crh、crhr1和crhr2基因相对表达量及血清皮质醇浓度。【结果】大口黑鲈crh、crhr1、crhr2基因ORF序列分别长510、1392和1245 bp，对应编码169、463和414个氨基酸残基；基于crh、crhr1和crhr2基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示，大口黑鲈与鲈形目鱼类聚为一支，尤其与小口黑鲈的亲缘关系最近。crh、crhr1和crhr2基因在大口黑鲈心脏、肝脏、肠道、肾脏、脑、鳃和肌肉等组织均有表达，且以脑组织中的相对表达量较高。急性高温应激后，大口黑鲈脑组织中crh、crhr1和crhr2基因相对表达量及血清皮质醇浓度均随时间推移呈先上升后下降的变化趋势，其中，crh和crhr1基因相对表达量及血清皮质醇浓度在高温应激后3 h(33.0℃)时达峰值，crhr2基因表达变化存在一定滞后性，其相对表达量在高温应激后6 h(30.4℃)时才达峰值。【结论】急性高温应激后大口黑鲈crh和crhr1基因的表达与血清皮质醇浓度变化趋势一致，而crhr2基因的表达滞后于皮质醇浓度变化，由此推测crh和crhr1基因参与皮质醇合成与分泌过程，与应激启动有关，而crhr2基因参与皮质醇的分解，与应激恢复相关。

• 饲料蛋白水平对大口黑鲈稚鱼生长、肠道结构及耐离水胁迫能力的影响

  覃瑶, 李诗洋, 梁浩辉, 陈晓瑛, 黄燕华, 周萌, 王国霞,

  【目的】探究不同饲料蛋白水平对大口黑鲈（Micropterus salmoides）稚鱼生长性能、肠道结构及耐离水胁迫能力的影响和大口黑鲈稚鱼对饲料蛋白的需求，为大口黑鲈稚鱼饲料的研发提供理论参考。【方法】配制实测蛋白含量分别为45.02%、48.14%、52.12%、55.54%、56.26%和58.17%的6种等脂等能饲料。选取2880尾初始体重为0.07±0.00 g的大口黑鲈稚鱼，随机分为6组，分别饲喂配制的6种等脂等能饲料，按照饲料蛋白水平由低到高设为T1、T2、T3、T4、T5、T6组，试验周期30 d。试验开始前随机选取50尾大口黑鲈稚鱼用于测定初始鱼体成分。试验结束后禁食24 h，每组随机取9尾大口黑鲈稚鱼测量体长，称量体质量及内脏团质量用于计算形体指标。每组随机取30尾大口黑鲈稚鱼于冰上解剖，取全肠和肝脏，用以检测消化酶和抗氧化酶活力。每组随机取2尾大口黑鲈稚鱼于冰上解剖，分离肠道，置于4%多聚甲醛中固定，用于制作组织切片。每组随机取20尾大口黑鲈稚鱼，用于测定鱼体成分。使用TRIzol法提取大口黑鲈稚鱼肌肉与肠道组织总RNA，并利用实时荧光定量PCR检测大口黑鲈稚鱼生长与抗氧化相关基因的相对表达量。【结果】随着饲料蛋白水平升高，大口黑鲈稚鱼的增重率和特定生长率呈先升高后降低的趋势，饲料系数则呈先降低后升高的趋势，其中T4组大口黑鲈稚鱼特定生长率显著高于T2、T3、T5和T6组（P<0.05，下同），T3组肝脏胰蛋白酶活力最高，显著高于T6组。离水胁迫处理后，T4组过氧化氢酶（CAT）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力最高，丙二醛（MDA）含量最低。实时荧光定量PCR结果显示，各组间生长相关基因IGF1、S6K、4EBP1和抗氧化相关基因CAT1的相对表达量无显著差异（P>0.05）。【结论】适宜饲料蛋白水平能提高大口黑鲈稚鱼的饲料利用效率，增加其增重率、特定生长率、蛋白沉积率和脂肪沉积率，进而获得最佳生长性能。以特定生长率为评价指标，通过折线模型分析得出，大口黑鲈稚鱼对饲料蛋白水平的最适需求量为55.05%（干物质）。同时，适宜饲料蛋白水平还能提高大口黑鲈稚鱼的抗氧化能力，为其应对离水胁迫奠定基础。

• 罗非鱼IgT重链单克隆抗体的制备

  陈林, 孙彤彤, 吴文德,

  【目的】制备具有活性的罗非鱼IgT重链单克隆抗体，为研究罗非鱼黏膜免疫应答提供基础材料。【方法】取无乳链球菌感染的吉富罗非鱼脾脏组织，提取总RNA。采用PCR扩增罗非鱼IgT重链恒定区CH2基因片段，构建原核表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组蛋白并用NiAgaroseResin进行纯化。以重组蛋白免疫6～8周龄BALB/c小鼠，经4次免疫后，取小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合。利用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞株，并通过间接ELISA与Western blotting检测对单克隆抗体亚型、效价和特异性进行鉴定。【结果】扩增获得长度约546 bp的IgT重链恒定区CH2基因片段，成功构建原核表达载体pET-32a(+)-IgT，在终浓度为1 mmol/L IPTG诱导下，获得分子量约38.3 kD的重组蛋白，以包涵体形式表达。以纯化的重组蛋白免疫小鼠，经测定血清抗体效价为1∶1280000以上，满足细胞融合要求。筛选获得4株能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株，其中2B11保藏于中国典型培养物保藏中心（保藏号：C2023390），单克隆抗体亚型鉴定结果表明，2B11重链为IgG2b型，制备的小鼠腹水抗体纯化前效价为1∶16000，纯化后效价为1∶8000。Westernblotting检测结果表明，制备的单克隆抗体能特异性识别罗非鱼皮肤黏液中大小约42kD的天然IgT。【结论】成功制备了具有活性的抗罗非鱼IgT单克隆抗体，可用于检测罗非鱼经病原微生物感染或疫苗接种后产生的抗体。

• 尼罗罗非鱼CD63基因克隆及表达特征分析

  李梓昕, 陈杨慧, 卢春兰, 黄瑜, 蔡佳, 王蓓,

  【目的】克隆尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）抗原分化簇63基因（CD63）并分析其在病原菌刺激后的表达情况，探究尼罗罗非鱼CD63基因在免疫应答中发挥的作用，为进一步研究CD63的免疫功能提供理论依据。【方法】对尼罗罗非鱼CD63基因进行克隆，利用生物信息学软件对尼罗罗非鱼CD63蛋白进行理化性质分析、跨膜结构域预测和系统进化分析等，采用实时荧光定量PCR检测尼罗罗非鱼CD63基因的组织表达特征及在无乳链球菌感染后的表达变化。【结果】尼罗罗非鱼CD63基因开放阅读框（ORF）长度为723 bp，编码240个氨基酸残基。尼罗罗非鱼CD63蛋白分子量为25.88 kD，理论等电点（pI）为8.38，蛋白平均亲水性系数（GRAVY）为0.745，为疏水性蛋白，不含信号肽，含4个跨膜结构域。进行比对分析发现，尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼等其他鱼类的CD63氨基酸序列相似性较高；系统进化分析结果表明，尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼亲缘关系最近。CD63基因在尼罗罗非鱼的脑、脾脏、肝脏、皮肤、头肾、鳃、心脏、后肠、血液和肌肉10种组织中均有表达，在肌肉中相对表达量最高，其次为血液和后肠，在脑中相对表达量最低。在无乳链球菌感染3～96 h,CD63基因在尼罗罗非鱼的鳃、心脏、头肾、脾脏、后肠、肌肉和皮肤中相对表达量最高值均较未感染时（0 h）显著上调（P<0.05，下同）；在感染96 h时，CD63基因在尼罗罗非鱼的脑、鳃、头肾、肝脏、脾脏、后肠、肌肉和皮肤中的相对表达量较最高值均显著下调。【结论】在无乳链球菌感染后，尼罗罗非鱼CD63基因在各组织中的表达均发生明显变化，表明CD63基因参与尼罗罗非鱼对病原菌刺激的免疫应答过程。

• 笼养绿尾虹雉大肠埃希菌耐药特征与毒力基因分析

  梁驹, 吴邦元, 肖英平, 冯少华, 徐小钦, 王彬, 周材权, 陈黎, 李万洪, 张龙,

  【目的】分析笼养绿尾虹雉大肠埃希菌的耐药特征与毒力基因携带状况，了解笼养绿尾虹雉大肠埃希菌耐药性及潜在风险，为绿尾虹雉驯养繁育过程中抗生素的合理使用及动物源细菌耐药性的遏制提供理论依据。【方法】于2022年1月、3月、4月、7月和10月采集四川蜂桶寨国家级自然保护区管护中心笼养绿尾虹雉新鲜粪便样本116份，进行细菌分离鉴定，通过药敏试验测定分离获得的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药表型，筛选鉴定产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的菌株，通过PCR扩增对13种耐药基因和9种毒力基因进行检测，并对代表性耐药表型与相关耐药基因进行关联分析。【结果】116份样本共分离获得84株大肠埃希菌，分离率为72.41%，其中有12株不耐受任何抗生素，耐受3种及以上抗生素的耐药菌株有53株，占63.10%，菌株的耐药数量最高为12种，耐药谱以氨苄青霉素、甲氧苄氨嘧啶和庆大霉素为主，平均耐药率分别为78.57%、75.00%和45.24%。耐药基因检测结果显示，多黏菌素类耐药基因pmrA的平均检出率最高，为80.95%。其他平均检出率达50.00%的耐药基因还有β-内酰胺类耐药基因blaTEM(70.24%)、氯霉素类耐药基因floR(57.14%)和磺胺类耐药基因sulⅠ（50.00%）；庆大霉素耐药性与氨基糖苷类耐药基因aadA1具有极显著关联性（P<0.01），而氨苄青霉素耐药性与blaTEM基因、甲氧苄氨嘧啶耐药性与sulI基因、环丙沙星耐药性与喹诺酮类耐药基因qnrS均无显著关联性（P>0.05，下同）。筛选鉴定出产ESBL菌36株，产ESBL菌对氨苄青霉素与甲氧苄氨嘧啶的耐药率均为100.00%，但产ESBL菌与blaTEM基因无显著关联性。对7月和10月粪便样本中分离的39株大肠埃希菌进行毒力基因检测，其中蛋白分泌物调节基因（escV）的检出率最高（17.95%），其次为肠定植因子基因（pic）(15.38%)，而侵袭性质粒调节基因（invE）未检出。【结论】笼养绿尾虹雉粪便中的大肠埃希菌具有多重耐药性并携带部分毒力基因，具有潜在致病性，耐药谱以耐氨苄青霉素、甲氧苄氨嘧啶和庆大霉素为主。在笼养绿尾虹雉的细菌性疾病防控治疗中，应控制对β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素的使用。