南方农业学报

作者：何海恩, 韦义荣, 沈宇龙, 邹剑伟, 吴少强, 李银, 卢俊, 梁一山, 黄艳娜, 蒋钦杨,

关键词：热应激, 湖羊, 骨骼肌细胞, 氧化应激, NOX2, p38, 细胞凋亡,

【目的】探讨热应激诱导湖羊骨骼肌细胞凋亡的分子机制，为解析热应激对湖羊产肉性能的抑制作用提供理论依据。【方法】41.5 ℃处理湖羊骨骼肌细胞构建热应激模型，使用CCK-8试剂盒检测细胞活力，确定热应激处理时间。采用试剂盒检测湖羊骨骼肌细胞活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。通过Hoechst 33258染色和流式细胞术检测湖羊骨骼肌细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测热休克蛋白、细胞凋亡和抗氧化相关基因及其编码蛋白的相对表达量。【结果】41.5 ℃处理3 d可成功构建湖羊骨骼肌细胞热应激模型。热应激下湖羊骨骼肌细胞中ROS水平极显著升高（P<0.01，下同），MDA含量显著升高（P<0.05，下同），SOD活性极显著降低，细胞核中出现大量固缩、浓染的强蓝色荧光斑块，细胞凋亡率极显著升高，促凋亡基因BAX和Caspase8的相对表达量分别显著和极显著升高，抗凋亡基因BCL-2和BCL-XL的相对表达量分别显著和极显著降低。热应激下湖羊骨骼肌细胞NOX2基因相对表达量极显著升高，NOX2蛋白相对表达量显著升高，使用抑制剂Apocynin干预后，热应激湖羊骨骼肌细胞NOX2蛋白相对表达量显著降低，ROS水平和MDA含量均极显著降低，SOD活性显著升高，细胞核固缩浓染明显减少，细胞凋亡率极显著降低。热应激下湖羊骨骼肌细胞中p38蛋白相对表达量极显著升高，磷酸化蛋白p-p38相对表达量显著升高，使用抑制剂Apocynin干预后，细胞中磷酸化蛋白p-p38相对表达量极显著降低。【结论】热应激可诱发湖羊骨骼肌细胞氧化应激级联反应。热应激通过提高NOX2基因及其编码蛋白的表达，导致细胞内ROS过量积累，ROS的过量积累激活了p38 MAPK信号通路，p38 MAPK信号通路通过调控凋亡相关基因的表达，介导了湖羊骨骼肌细胞凋亡。

来源：2025年第12期

《南方农业学报》期刊编辑部

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