南方农业学报

作者：马良, 黄袁慧, 罗茜, 梁俊泽, 张子逸, 李晓宁, 罗廷荣,

关键词：狂犬病病毒（RABV）, TCP1伴侣蛋白亚基5（CCT5）, 免疫共沉淀, 细胞共定位, 病毒复制,

【目的】 明确宿主蛋白CCT5与狂犬病病毒M蛋白的互作关系及过表达CCT5基因对RABV复制的影响，为揭示CCT5蛋白在RABV复制过程中的作用机制提供理论依据。【方法】 采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测RABV感染BHK-21细胞和N2a细胞后CCT5、M、N、P和G基因及其编码蛋白的相对表达量。PCR扩增CCT5基因并克隆至载体pcDNA3.0上构建真核表达载体，转染HEK-293T细胞后检测CCT5蛋白表达情况并筛选最佳转染时间。通过GST-pull down、Co-IP和细胞共定位试验验证CCT5蛋白与RABV M蛋白的互作关系，并探究CCT5基因过表达对RABV复制的影响。【结果】 RABV感染BHK-21细胞后，N、P、M和G基因相对表达量整体上有所升高，而CCT5基因相对表达量变化不明显。RABV感染N2a细胞后，CCT5蛋白相对表达量变化不明显。以真核表达载体pcDNA3.0-CCT5-Flag转染HEK-293T细胞，在转染36 h的CCT5蛋白相对表达量最高。GST pull-down验证结果显示，CCT5蛋白与RABV M蛋白在体外存在互作关系。Co-IP验证结果显示，CCT5蛋白与RABV M蛋白在细胞内存在互作关系。细胞内共定位验证结果显示，CCT5蛋白与RABV M蛋白在细胞质内存在广泛的共定位。CCT5基因过表达能从转录、翻译及子代病毒产生等多个层面促进RABV的复制。【结论】 宿主分子伴侣蛋白CCT5与RABV M蛋白在体内外均存在互作关系，且二者共定位于细胞质。RABV在不同细胞系中并不调控CCT5基因及其蛋白的表达，但过表达CCT5基因可促进RABV基因的转录和翻译水平及子代病毒产生，对RABV复制具有正向调控作用。

来源：2025年第10期

《南方农业学报》期刊编辑部

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