南方农业学报

作者：王辰怡, 傅威, 李若铭, 陈佳佳, 李名志, 夏晓锦, 翁雅萍, 孔令保, 彭棋, 王婷,

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒, Nsp10蛋白, 原核表达, 多克隆抗体, 免疫原性,

【目的】 构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp10蛋白原核表达系统，制备多克隆抗体，系统评价其免疫原性，为基于Nsp10蛋白的血清学诊断方法建立与疫苗研发提供理论依据。【方法】 利用ExPASy、IEDB和SWISS-MODEL分别预测Nsp10蛋白的亲/疏水性、抗原表位和三级结构。构建重组质粒pET-28a-Nsp10，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达，优化诱导温度、IPTG浓度和诱导时间。采用His-Bind镍离子亲和层析柱纯化重组Nsp10蛋白（rNsp10），利用SDS-PAGE与Western blotting检测纯化效果。使用纯化后的rNsp10蛋白免疫C57BL/6J小鼠，利用间接ELISA法测定抗体效价与亚型。采用实时荧光定量PCR检测脾细胞中免疫应答相关基因的相对表达量，利用Western blotting与间接免疫荧光检测抗体反应原性。【结果】 Nsp10蛋白为亲水性蛋白，存在19个B细胞抗原表位，具备作为多克隆抗体制备靶抗原的潜力。利用原核表达系统成功构建重组质粒pET-28a-Nsp10，在18~37 ℃条件下使用1.5 mmol/L IPTG诱导8 h可实现rNsp10蛋白的高效表达，且其主要以包涵体形式存在，纯化后产量达15 mg/L。以rNsp10蛋白免疫C57BL/6J小鼠可诱发强烈的体液免疫应答，抗体效价最高达1∶409600，且能在免疫后期维持较高水平。抗体亚型与免疫应答检测结果显示，rNsp10蛋白免疫不仅能诱导以IgG1为主的体液免疫，还能极显著升高Th2型体液免疫相关基因IL-4和IL-10的相对表达量与Th1型细胞免疫相关基因IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF-α和IL-12的相对表达量（PIFN-γ和IL-12等基因为特征的细胞免疫。rNsp10鼠源多克隆抗体能特异性识别PRRSV在感染过程中表达的天然蛋白Nsp10。

来源：2025年第10期

《南方农业学报》期刊编辑部

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