南方农业学报

作者：徐齐, 戴习林, 付元帅, 李云,

关键词：罗氏沼虾, novel miR-56, 靶基因, 免疫相关基因, Toll信号通路,

【目的】 揭示novel miR-56对罗氏沼虾免疫相关基因的调节机制，为进一步探究miRNA参与罗氏沼虾先天免疫调节提供理论依据。【方法】 以实时荧光定量PCR检测副溶血弧菌感染后罗氏沼虾鳃组织中的novel miR-56表达变化，采用RNAhybrid预测筛选出novel miR-56的潜在靶基因TLR1，通过双荧光素酶报告基因检测验证novel miR-56与靶基因TLR1的靶向关系；体外注射不同剂量（0.6、1.0和1.5μg/g）的agomiR-56和antagomiR-56干扰novel miR-56表达，筛选出agomiR-56和antagomiR-56的最佳注射剂量，并以实时荧光定量PCR检测罗氏沼虾免疫相关基因的表达变化。【结果】 感染副溶血弧菌后，罗氏沼虾鳃组织中的novel miR-56相对表达量随感染时间的推移呈逐渐上升趋势，至感染后72 h,novel miR-56相对表达量约是感染前（0 h）的6.18倍。TLR1是novel miR-56的靶基因，二者的结合位点位于TLR1基因3'非编码区（3'-UTR），且novel miR-56过表达会抑制TLR1基因的表达。于罗氏沼虾围心腔注射0.6、1.0和1.5μg/g的agomiR-56均能显著抑制TLR1基因表达（P<0.05，下同），且以1.5μg/g agomiR-56的抑制效果最优；罗氏沼虾其他免疫相关基因（Spz、TLR2、TLR3、MyD88、IMD、Crustin1、Wntless、ALF1和proPO）在注射agomiR-56后的相对表达量也显著降低。antagomiR-56注射试验结果则恰好相反，注射不同剂量的antagomiR-56对罗氏沼虾TLR1基因有显著促进效果，且随着注射剂量的升高，对罗氏沼虾TLR1基因表达的促进效果呈先上升后下降的变化趋势，以1.0μg/g为antgomiR-56体外注射的最适剂量；罗氏沼虾其他免疫相关基因在注射antgomiR-56后的相对表达量均显著上升。【结论】 TLR1是novel miR-56的靶基因，其结合位点位于TLR1基因3'-UTR。novel miR-56通过靶向抑制TLR1基因表达而参与Toll信号通路调控，具有抑制罗氏沼虾免疫相关基因表达的功能。

来源：2025年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

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