南方农业学报

作者：刘明珠, 谢瑾琨, 余庆, 黄静, 王一兵, 徐继卫, 常彦磊, 黄广杰, 韩书煜, 李鹏飞,

关键词：石斑鱼虹彩病毒(SGIV), 核酸适配体, TAA-LYGV1c, 快速检测,

【目的】 构建能特异性识别石斑鱼虹彩病毒（SGIV）的激活式核酸适配体探针，为开发特异性识别SGIV的快速检测试剂盒提供技术支持，实现对SGIV感染的早期诊断及精准防控。【方法】 基于可特异性识别SGIV感染宿主细胞的核酸适配体LYGV1，通过加入T链、C链、荧光基团及淬灭基团等功能化修饰，成功构建获得靶标激活式核酸适配体TAA-LYGV1c；然后通过流式细胞仪分析、激光共聚焦显微镜观察及实时荧光定量PCR等技术系统验证TAALYGV1c对SGIV的特异性识别能力，并对其最适工作浓度、孵育时间、孵育温度及识别靶细胞检测限等条件进行优化，以评估TAA-LYGV1c的可操作性；最后构建SGIV感染模型，通过流式细胞仪检测分析和实时荧光定量PCR进一步探究TAA-LYGV1c在实际生产中的应用价值。【结果】 加入TAA-LYGV1c后SGIV感染组石斑鱼脾脏（GS）细胞的荧光值极显著高于未加入TAA-LYGV1c的SGIV感染组（P<0.01，下同），同时极显著高于空白对照组和神经坏死病毒（NNV）感染组，说明TAA-LYGV1c可特异性识别SGIV感染。TAA-LYGV1c的最适工作浓度为500 nmol/L，最适孵育温度为28℃，最短孵育1 min即可检测到荧光。不同检测方法的最低检测限存在一定差异，其中，流式细胞仪检测分析TAA-LYGV1c识别靶细胞的检测限为5×103个/mL，荧光酶标仪检测分析的最低检测限与实时荧光定量PCR检测的最低检测限均为500个/mL，即检测灵敏度与仪器的检测原理存在一定关联。在活体检测中，基于TAA-LYGV1c的流式细胞仪检测分析结果与实时荧光定量PCR检测结果一致，进一步证实TAA-LYGV1c能特异性识别SGIV感染，也说明核酸适配体在水产养殖病原检测方面具有潜在的应用价值。【结论】 开发的激活式核酸适配体TAA-LYGV1c具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优势，可实现对SGIV感染的早期快速诊断，为开发特异性识别SGIV的快速检测试剂盒提供技术支持。

来源：2025年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

查看南方农业学报杂志2025年第6期