南方农业学报

作者：林世锋, 王仁刚, 杨志晓, 王自力, 李莉, 朱秀, 陈越男,

关键词：豆伞滑刃线虫, 类转甲状腺素, 生物信息学, 表达分析, 原位杂交,

【目的】克隆豆伞滑刃线虫（Bursaphelenchus doui）类转甲状腺素（Transthyretin-like，TTL）基因Bd-TTL-1并进行表达特性分析，为进一步研究该基因的生物学功能打下基础。【方法】以植物寄生线虫豆伞滑刃线虫为试验材料，以其体前端cDNA为试验方，体后端cDNA为驱动方，利用固相消减杂交方法构建豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。利用反向Northern杂交和测序筛选文库，结合RACE技术获得Bd-TTL-1基因全长序列，并利用生物信息学软件及数据库对Bd-TTL-1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、同源性和保守结构域进行预测分析。利用实时荧光定量PCR和原位杂交分别进行基因发育模式和表达定位分析。【结果】成功构建1个豆伞滑刃线虫体前端特异cDNA文库。通过反向Northern杂交、测序与RACE技术相结合的方法克隆获得豆伞滑刃线虫TTL全长基因Bd-TTL-1，GenBank登录号PQ276066。Bd-TTL-1基因DNA编码区全长497 bp，包括2个外显子和1个内含子；cDNA编码区全长435 bp，编码144个氨基酸。预测Bd-TTL-1蛋白的相对分子量为15.86 kD，理论等电点为9.37；Bd-TTL-1蛋白含有1个典型且保守的TTL蛋白结构域，存在信号肽但无跨膜结构域，属于分泌性蛋白。实时荧光定量PCR结果显示，Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫各发育阶段均有表达，但在虫卵期表达微弱，显著低于其他发育阶段（PBd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫的食道腺特异表达。【结论】豆伞滑刃线虫Bd-TTL-1蛋白的氨基酸序列含有1个TTL蛋白保守结构域，是一种具有信号肽但无跨膜结构域的分泌性蛋白；Bd-TTL-1基因在豆伞滑刃线虫食道腺中特异表达，初步推测编码蛋白在寄生过程中通过口针释放到体外发挥作用。

来源：2025年第3期

《南方农业学报》期刊编辑部

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