南方农业学报

作者：焦健, 李能秀, 左雨霏, 马忠梅, 常意行, 张石磊, 孟庆玲, 才学鹏, 乔军,

关键词：单核细胞增多性李斯特菌, 外泌体, 巨噬细胞, CD8⁺T淋巴细胞,

【目的】分离感染单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）RAW264.7巨噬细胞分泌的外泌体（Exosomes,Exos），探究其对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用及机制，为揭示LM感染、胞内生存及免疫逃逸机制提供理论参考。【方法】通过差异超速离心法结合分子排阻法提取感染LM后RAW264.7巨噬细胞外泌体（LM-Exos），利用透射电子显微镜、粒径分析仪和Western blotting鉴定LM-Exo表型。通过实时荧光定量PCR、细胞活力检测和ELISA等方法分析不同剂量LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用。【结果】LM-Exos具有双层膜结构类圆形的小囊泡，直径约为60～80nm。Westernblotting检测结果显示，LM-Exos表面含有CD9、CD63、TSG101特异性标记蛋白。LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞形态和功能的影响具有明显的浓度依赖性，随着LM-Exos刺激时间延长，细胞形态由圆形逐渐分化为长梭形，并伸出不同形态的伪足。实时荧光定量PCR结果显示，随着LM-Exos刺激浓度的增加，IL-1β、IL-10、IL-6和TNF-α基因相对表达量均呈升高趋势。高浓度LM-Exos刺激后，RAW264.7巨噬细胞活力略有下降但抗LM EGD-e能力增强。与低浓度LM-Exos刺激相比，高浓度LM-Exos刺激显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）提高了CD8+T淋巴细胞TNF-α和IL-10相对分泌水平，并诱导了CD8+T细胞形态变化及凋亡水平升高。【结论】不同剂量的LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞表现出不同的调控作用。LM-Exos能增强RAW264.7巨噬细胞抗LM EGD-e能力，同时也能诱导CD8+T淋巴细胞分化和凋亡。LM-Exos可以作为免疫激活剂，增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能，高剂量的LM-Exos可能会通过诱导T细胞凋亡来减弱机体的免疫应答，进而实现LM免疫逃逸，这种双重作用可能是LM在感染过程中实现免疫逃逸的重要机制。

来源：2024年第12期

《南方农业学报》期刊编辑部

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