南方农业学报

作者：宋丹丹, 金奕欣, 黄袁慧, 王文锋, 闵开骏, 张传亮, 罗廷荣, 李晓宁,

关键词：猪瘟病毒, E^rns蛋白, 原核表达, 多克隆抗体,

【目的】 制备猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）Erns蛋白多克隆抗体，为进一步研究Erns蛋白结构和功能及解析CSFV的致病机理提供理论依据。【方法】 采用生物信息学方法预测Erns蛋白结构。以真核表达载体pCMV-HA-Erns为模板，PCR克隆CSFV Erns基因，构建原核表达载体pET-32a-Erns。将pET-32a-Erns转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，添加IPTG诱导Erns蛋白表达，确定Erns蛋白表达形式。利用Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白，以获得高纯度的Erns蛋白。采用背部皮下多点注射法免疫小鼠，经4次免疫后采集小鼠血液，分离血清制备获得Erns蛋白多克隆抗体，并检测其效价和特异性。【结果】 Erns蛋白不含信号肽和跨膜结构域，为亲水性蛋白，含有多个B细胞抗原表位；Erns基因片段大小为681 bp，其重组蛋白主要以包涵体形式表达；Erns蛋白多克隆抗体对原核表达的重组蛋白效价为1∶64000，对真核表达的重组蛋白效价为1∶1000，且能特异性识别CSFV。【结论】 制备获得的Erns蛋白多克隆抗体具有效价高和特异性强等特点，可用于ELISA和Western blotting检测细胞中Erns蛋白水平。Erns蛋白多克隆抗体的制备有助于更好地理解Erns蛋白在CSFV感染和免疫过程中的作用，对深入研究Erns蛋白功能、CSFV生物学特性及猪瘟的防治和诊断方法的开发具有重要意义。

来源：2024年第9期

《南方农业学报》期刊编辑部

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