南方农业学报

作者：刘姝瑶, 李倩倩, 文静, 金博阳, 张明达, 谭茗月, 沈秀丽, 杜志强,

关键词：克氏原螯虾, 双氧化酶1基因（<i>duox1</i>）, 金黄色葡萄球菌, RNA干扰, 抗菌肽基因,

【目的】探究双氧化酶1基因（duox1）在克氏原螯虾抵抗金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）侵染先天免疫应答中的作用机制，为确保克氏原螯虾产业的持续健康发展提供技术支撑。【方法】采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌刺激后，duox1基因在克氏原螯虾血细胞、肝胰腺、肠道及鳃组织中的表达情况；通过RNA干扰（RNAi）敲低duox1基因表达再进行金黄色葡萄球菌刺激，统计克氏原螯虾存活率，采用H2O2含量检测试剂盒检测肝胰腺H2O2含量，电子显微镜下观察血淋巴黑化现象，并以实时荧光定量PCR检测肝胰腺中抗菌肽基因（toll1、dorsal、crustin3和crustin4）的表达情况。【结果】经金黄色葡萄球菌刺激后，克氏原螯虾duox1基因在血细胞、肝胰腺、肠道及鳃组织中的相对表达量较PBS组整体上呈上升趋势，故推测duox1基因参与克氏原螯虾的抗菌先天免疫应答，具有潜在的抵抗细菌侵染作用。与dsGFP+金黄色葡萄球菌组相比，经RNA干扰及金黄色葡萄球菌刺激后，克氏原螯虾存活率呈明显下降趋势，肝胰腺H2O2含量呈先降低后回升的变化趋势（在刺激后24 h达最低值），且克氏原螯虾血淋巴黑化反应程度明显减弱。干扰duox1基因表达并感染金黄色葡萄球菌后，克氏原螯虾肝胰腺Toll信号通路上的抗菌肽基因（toll1、dorsal、crustin3和crustin4）表达被抑制，导致参与抗菌反应的先天免疫能力下降，最终引起克氏原螯虾存活率下降。【结论】克氏原螯虾duox1基因通过调控H2O2产生、影响血淋巴黑化现象及调控toll1、dorsal、crustin3和crustin4等抗菌肽基因的表达，参与机体的先天免疫应答，进而协助机体抵御金黄色葡萄球菌的侵染。

来源：2024年第8期

《南方农业学报》期刊编辑部

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