南方农业学报

作者：田晓丽, 宋旭荣, 毛永娜, 李传仁, 张国辉,

关键词：黄曲条跳甲, 短链气味结合蛋白, 分子特征, 组织表达模式, 荧光结合试验,

【目的】分析黄曲条跳甲（Phyllotreta striolata）短链气味结合蛋白（Odorant binding protein，OBP）基因PstrOBP-sc分子和功能特点，为揭示昆虫短链OBP基因的功能提供参考。【方法】利用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）克隆黄曲条跳甲短链Classic OBP基因，并对其进行生物信息学分析；通过逆转录聚合酶链反应技术分析短链OBP基因在黄曲条跳甲雌、雄成虫不同组织中的表达情况；构建重组表达载体异源表达短链OBP基因，以聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blotting）验证目的蛋白；运用荧光结合试验检测短链OBP的配体结合能力。【结果】通过逆转录聚合酶链反应克隆验证，成功获得1条具有完整开放阅读框的黄曲条跳甲短链OBP基因PstrOBP-sc。PstrOBP-sc基因含有1个357 bp的开放阅读框，编码118个氨基酸残基，N末端具有1个由20个氨基酸残基组成的信号肽，成熟蛋白PSTROBP-SC仅由98个氨基酸残基组成，序列中含有6个保守的半胱氨酸，属于典型短链OBP基因。蛋白二级结构预测结果显示，PSTROBP-SC蛋白仅存在5个α-螺旋，且在第5个α-螺旋的下游仅有2个氨基酸残基。PstrOBP-sc基因组织表达模式及异源表达的PSTROBP-SC蛋白配体结合能力研究结果表明，PstrOBP-sc基因在黄曲条跳甲雌、雄成虫的所有供试组织中均有表达，而非特异性表达于嗅觉器官。同时，异源表达PSTROBP-SC不能结合荧光探针1-NPN。【结论】PstrOBP-sc基因的分子和功能特点不同于当前广泛研究的中长链OBP基因，其在生物体内很可能行使嗅觉以外的其他生理功能。

来源：2024年第8期

《南方农业学报》期刊编辑部

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