南方农业学报

作者：于雪, 裴丹, 房经贵,

关键词：葡萄, 染色体制片, 5S rDNA, 45S rDNA, 荧光原位杂交,

【目的】优化葡萄染色体制片技术并分析14个葡萄品种rDNA分布特征，为葡萄染色体鉴定、变异分析及葡萄品种间的细胞遗传学背景差异解析研究提供参考依据。【方法】以14个葡萄品种当年生半木质化枝条水培长出的根尖为试验材料，以冰水混合物处理根尖24 h后1 MPa笑气（N2O）处理30 min为对照，设0.2 μmol/L的甲基氨草磷溶液（APM）浸泡根尖2 h后1 MPa N2O不同时长（0、30和60 min）处理，筛选染色体制片条件并计算各处理下形态良好的中期分裂相占比；比较酶解滴片法及火焰干燥法的染色体制片效果。以45S rDNA和5S rDNA为探针采用双色荧光原位杂交（FISH）技术分析rDNA在14个葡萄品种染色体上的分布特征。【结果】对照中葡萄根尖材料形态良好的中期分裂相占比仅为32.22%，FISH后易产生背景信号且信号模糊，采用APM处理2 h后1 MPa N2O处理30 min得到的染色体制片形态良好的中期分裂相占比最高，达80.00%，且染色体浓缩适当，FISH信号质量良好。采用火焰干燥法获得的制片细胞分散程度适中，中期分裂相多。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上始终呈连锁状态；5S rDNA信号与染色体组数目相关，在二、三、四倍体中的数量分别为2、3和4个。45S rDNA信号在二、三、四倍体中的数量分别为4、6和7个，在红香蕉葡萄中只有3个；5S rDNA信号位于17号染色体上，45S rDNA位于17和15号染色体。意大利和碧香无核葡萄例外，意大利葡萄2个未与5S rDNA连锁的45S rDNA位于15和16号染色体，碧香无核葡萄1个与55 rDNA连锁的45 rDNA位于15号染色体，1个未与55 rDNA连锁的45S rDNA位于17号染色体上。【结论】制作葡萄根尖中期染色体制片较优方法是APM预处理2 h后1 MPa N2O处理30 min，使用火焰干燥法制片。45S rDNA和5S rDNA在葡萄染色体上呈连锁排列，在二、三、四倍体中数量不同。14个葡萄品种的45S rDNA和5S rDNA在染色体上呈L形排列，5S rDNA位点数量比45S rDNA位点数量更稳定。

来源：2024年第8期

《南方农业学报》期刊编辑部

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