南方农业学报

作者：林永进, 冯佩然, 杨亚林, 郭政, 李亚娟, 李舜, 孙芹芹, 黄云飞, 付强,

关键词：马链球菌兽疫亚种(SEZ), 表面蛋白, <i>SeseC-02147</i>基因, 免疫效力, 亚单位疫苗,

【目的】 通过原核表达系统制备马链球菌兽疫亚种（SEZ）重组表面蛋白rSeseC-02147，并系统评价其抵御SEZ感染的免疫效力，为SEZ亚单位疫苗的研发提供候选抗原。【方法】 构建原核表达载体pColdI-SeseC-02147，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，纯化回收重组蛋白rSeseC-02147并免疫BALB/c小鼠，以SEZ灭活疫苗为阳性对照、PBS为阴性对照，二免后第14 d于小鼠颌下静脉采集血清，分别采用Western blotting和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测重组蛋白r SeseC-02147反应原性及小鼠血清抗体效价和抗体亚型属性；并通过小鼠免疫保护试验、腹腔灌洗液细菌载量测定及脏器组织病理学观察，系统评估重组蛋白rSeseC-02147对小鼠的免疫保护力。【结果】 构建的原核表达载体pColdI-SeseC-02147经IPTG诱导能成功表达获得重组蛋白rSeseC-02147，其纯化后的浓度为2.86mg/mL。重组蛋白r SeseC-02147能与免疫组和阳性对照组小鼠血清发生特异性反应，而与阴性对照组小鼠血清未发生特异性反应，表明重组蛋白rSeseC-02147具有良好的反应原性与特异性；以重组蛋白rSeseC-02147免疫小鼠产生的血清抗体效价远高于SEZ灭活疫苗，且IgG1亚型极显著高于IgG2a亚型（P&lt;0.01，下同）。重组蛋白rSeseC-02147可为小鼠提供抵御SEZ感染的免疫保护力，攻毒后14 d内的存活率60%；此外，重组蛋白rSeseC-02147免疫小鼠后的腹腔灌洗液细菌载量极显著低于阴性对照组小鼠，且肺脏、肾脏和脾脏等组织的病理损伤程度较轻。【结论】 通过原核表达系统制备获得的重组蛋白rSeseC-02147具有良好的特异性与反应原性，通过抑制SEZ增殖及减轻SEZ对机体脏器的损伤而发挥免疫保护作用。可见，重组蛋白rSeseC-02147具有开发成SEZ亚单位疫苗的潜力。

来源：2024年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

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