南方农业学报

作者：李菲, 曹永琼, 王纲, 郭彦兵, 李紫薇, 吴红芝,

关键词：彩色马蹄莲, 根癌农杆菌, 遗传转化, 优化,

【目的】 建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲（Zantedeschia hybrida）遗传转化体系，为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】 将不同外植体（茎基、叶、不定芽）和不同浓度噻苯隆（TDZ）(0.001、0.002和0.005g/L)进行正交试验筛选外植体和丛生芽增殖培养基；液氮冻融法将pCAMBIA2301和pBI121质粒转入农杆菌LBA4404感受态细胞。以β-葡萄糖苷酸酶（GUS）基因作为农杆菌介导转化测定的报告基因，对彩色马蹄莲的丛生芽进行遗传转化，阳性苗经PCR扩增验证转化结果。通过不同硫酸卡那霉素（Kan）浓度（50、100和150 mg/L）、侵染时间（25、30和40 min）及共培养时间（2和3 d）3因素正交试验筛选最佳转化条件。【结果】 外植体为不定芽的丛生芽诱导率极显著高于茎基和叶（P<0.01），当不定芽为外植体、TDZ浓度为0.002mg/L时，丛生芽增殖倍数（5.12倍）显著高于0.001和0.005mg/LTDZ处理（P<0.05），筛选出M6培养基+0.002mg/L TDZ+30g/L蔗糖+6.25g/L琼脂为丛生芽增殖培养基；影响阳性频率因素排序为：侵染时间>Kan浓度>共培养时间。当Kan浓度为50 mg/L、侵染时间25 min及共培养时间为3 d为最优侵染条件，此时，GUS+丛生芽出芽频率和PCR阳性频率最高，分别为54.0%和15.27%。【结论】 成功优化彩色马蹄莲遗传转化体系，最佳外植体为不定芽，转化体系最佳组合为Kan浓度为50 mg/L、侵染时间为25 min及共培养时间为3 d。

来源：2024年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

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