南方农业学报

作者：方静, 钱敏桦, 陈泓霖, 杨绍宇, 蔡小辉,

关键词：太平洋牡蛎, 髓样分化因子88(MyD88), 基因克隆, 溶藻弧菌, 表达模式,

【目的】克隆太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）新型髓样分化因子88（MyD88）基因MyD88-3，分析其在溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）感染后的表达模式，为探究太平洋牡蛎MyD88基因在免疫调控中的作用和太平洋牡蛎健康养殖提供理论依据。【方法】克隆CgMyD88-3基因编码区（CDS），运用ProtScale、SWISS-MODEL和InterPro等进行生物信息学分析，采用实时荧光定量PCR分析溶藻弧菌感染前后，CgMyD88-3基因在太平洋牡蛎不同组织中的表达情况。【结果】CgMyD88-3基因CDS长度为537 bp，共编码178个氨基酸残基，CgMyD88-3蛋白相对分子量为20.74 kD，理论等电点为6.10。亚细胞定位预测结果显示CgMyD88-3蛋白位于细胞质，含5个酪蛋白激酶II磷酸化位点(17TEED20、29SNLE32、76TQNE79、118TAND121、123TKED126)和3个蛋白激酶C磷酸化位点(26TMK28、148TAK150、169SEK171)。CgMyD88-3氨基酸序列只含1个TIR（Toll/interleukin-1 receptor）结构域，不含Death结构域。CgMyD88-3氨基酸序列与美洲牡蛎（Crassostrea virginica）CvMyD88-like氨基酸序列相似性最高，为100%，基于MyD88氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示，CgMyD88-3先和美洲牡蛎CvMyD88-like聚为一支，然后与太平洋牡蛎CgMyD88-T1和CgMyD88-T2聚为一支。实时荧光定量PCR检测发现，CgMyD88-3基因在健康太平洋牡蛎6种组织中均有表达，相对表达量最高的为外套膜组织，鳃组织次之，在其他组织中依次为血细胞>性腺>消化腺>闭壳肌。溶藻弧菌感染后，太平洋牡蛎闭壳肌、消化腺、血细胞和鳃组织中的CgMyD88-3基因相对表达量均明显升高，在闭壳肌、消化腺和血细胞中感染72 h后达最高，在鳃中感染6 h后达最高，而在外套膜组织中感染后各时间段的CgMyD88-3基因相对表达量均低于0 h。【结论】CgMyD88-3基因在健康的太平洋牡蛎各组织中均有分布，在外套膜中的相对表达量最高。溶藻弧菌刺激可诱导Cg MyD88-3基因高表达，表明CgMyD88-3基因可能在太平洋牡蛎抵御外界微生物及病原体感染中扮演重要角色。

来源：2024年第5期

《南方农业学报》期刊编辑部

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