南方农业学报

作者：张鹏远, 黄久妍, 童海珍, 胡博, 余潇, 雷小铃, 王娟,

关键词：蒜头果, ISSR-PCR, 体系优化, 验证,

【目的】建立稳定的蒜头果ISSR-PCR反应体系，筛选出适用于蒜头果的多态性引物，为后续蒜头果遗传多样性研究及种质资源保护提供参考依据。【方法】采用单因素试验与L25（54）正交试验相结合的方法，对影响ISSR-PCR反应体系扩增效果的4个主要因素（模板DNA用量、引物浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶）及反应循环数进行优化，确定最佳反应体系和条件。在此基础上筛选出适用于蒜头果的多态性引物，探究其最佳退火温度，并采集云南省境内3个野生居群10个蒜头果样品对优化的反应体系进行验证。【结果】蒜头果ISSR-PCR最佳反应体系（20.0 μL）：模板DNA 30 ng，ISSR引物0.3 μmol/L，dNTPs 0.250 mmol/L，Taq DNA聚合酶1.00 U，ddH2O补足至20.0 μL。ISSR最佳反应程序为30个循环。利用优化后的反应体系筛选出了8条引物（UBC825、UBC826、UBC827、UBC836、UBC844、UBC861、UBC834和UBC851）的最佳退火温度，分别为50.2、56.5、50.2、56.5、50.2、50.2、50.2和54.0℃，部分引物（如UBC827、UBC836、UBC861等）实测最佳退火温度与软件预测退火温度存在明显差异。采用优化后的ISSR-PCR反应体系及引物对10个蒜头果样品进行ISSR-PCR分子标记检测，结果显示建立的ISSR-PCR反应体系稳定可靠，不同采样点的蒜头果在遗传上相对保守，且10个蒜头果样品的遗传分化系数（Gst）为0.74，说明其74%的遗传多样性存在于居群间，且基因流（Nm）为0.18，远小于1.00，说明发生遗传漂变的概率大，易发生遗传多样性降低及居群分化。【结论】通过优化蒜头果ISSR-PCR反应体系，建立可用于蒜头果ISSR-PCR分子标记扩增的稳定反应体系，可用于蒜头果种质资源保护与利用研究工作。

来源：2024年第3期

《南方农业学报》期刊编辑部

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