南方农业学报

作者：刘辉, 李霞, 乌恩, 常静, 李志平, 霍志家, 李桂英, 武建华,

关键词：巴氏新小绥螨, SSR, 高通量测序, 序列分析, 表达量,

【目的】开发巴氏新小绥螨（Neoseiulus barkeri）高效氯氟氰菊酯抗药和敏感品系的微卫星（SSR）分子标记，为其抗药性基因遗传分析和抗药性品系的快速鉴定及筛选提供理论基础。【方法】应用MISA对巴氏新小绥螨转录组已注释的Unigenes数据进行搜索，高通量挖掘该螨的SSR位点。使用Primer 5.0进行SSR引物设计，随机挑选其中25对引物对巴氏新小绥螨高效氯氟氰菊酯抗性和敏感品系SSR位点基因进行PCR扩增，用重复性和稳定性高的12对引物进行实时荧光定量PCR分析基因表达。【结果】2个品系共获得52741条Unigenes，且SSR位点数量和分布密度一致。共筛选出5483个SSR位点，分布在4276条Unigenes中，发生频率为8.11%。主要重复类型为三核苷酸重复，占SSR总数的43.75%。共发现81种重复基元，其中单核苷酸重复基元A/T出现频率最高，占总量的19.65%。基于筛选出的SSR，共设计出4570对SSR引物，随机挑选的25对引物中有23对可扩增出巴氏新小绥螨高效氯氟氰菊酯抗性和敏感品系的目的基因片段。实时荧光定量PCR扩增结果显示，巴氏新小绥螨高效氯氟氰菊酯抗性品系有8个SSR基因位点的表达量高于敏感品系，其中TRINITY_DN24111_c0_g1基因的相对表达量为4.11，极显著高于敏感品系（1.06）（P<0.001，下同）；有4个SSR位点基因的相对表达量低于敏感品系，其中TRINITY_DN20624_c0_g1基因的相对表达量为0.68，极显著低于敏感品系（1.01）。【结论】巴氏新小绥螨转录组SSR位点多态性丰富，已筛选开发出的12对在巴氏新小绥螨抗性和敏感品系中表达量不同的SSR特异性引物可应用于对各地巴氏新小绥螨种群对高效氯氟氰菊酯抗药性的快速检测。

来源：2024年第3期

《南方农业学报》期刊编辑部

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