南方农业学报

作者：唐芬芬, 杨伟克, 张祖芸, 何超, 沈登荣, 张睿, 谢昆,

关键词：家蚕, 家蚕核型多角体病毒(BmNPV), 热激蛋白, RNA干扰,

【目的】探究家蚕热激蛋白(Hsp25.4)基因在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrovirus,Bm NPV)侵染家蚕后的表达变化规律,明确敲低该基因表达后对BmNPV增殖复制的影响,为深入解析BmHsp25.4'蛋白在BmNPV侵染家蚕过程中发挥的作用提供参考依据。【方法】以5龄家蚕幼虫为研究对象,经口添食10µL预先制备好的BmNPV-T3株病毒悬液(5×108个/mL),对照组添食等量灭菌水,采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4'基因在BmNPV侵染6 h各组织的表达情况,并选择相对表达量较高的3个组织,分析BmHsp25.4'基因时空表达图谱;注射双链RNA(dsRNA)检测BmHsp25.4'基因在体内的干涉效果,采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4'基因干涉后对BmNPV增殖复制的影响。【结果】BmNPV侵染家蚕6 h,BmHsp25.4'基因在家蚕血液、中肠和脂肪体组织中的相对表达量升高;时空表达谱结果显示,BmHsp25.4'基因在3个组织中的表达谱均呈先升高后降低的变化趋势,其中血液和中肠组织的相对表达量均在6h达峰值,而脂肪体则在BmNPV侵染12h时相对表达量达最高;注射dsRNA干涉后,试验组BmHsp25.4'基因的相对表达量与对照组相比极显著降低61.81%(P<0.01,下同),说明BmHsp25.4'基因的相对表达量被成功干涉;BmHsp25.4'基因干涉后,感染24 h ds BmHsp25.4'的gp41基因在各时期相对表达量极显著高于对照ds GFP处理,感染48 h二者差异显著(P<0.05)。【结论】BmNPV侵染能引起BmHsp25.4'基因的表达,并且敲低BmHsp25.4'基因的表达能提高BmNPV早期在虫体内的增殖,推测Hsp25.4蛋白在家蚕的抗病毒免疫中发挥关联功能。

来源：2023年第12期

《南方农业学报》期刊编辑部

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