南方农业学报

作者：毕欢, 袁巍, 张雨丹, 陈伟,

关键词：剑白香猪, miR-2366, 多巴色素异构酶基因(<i>DCT</i>), 黑色素,

【目的】明确miR-2366通过靶向作用多巴色素异构酶基因(DCT)对黑色素细胞中黑色素生成的影响,为解析剑白香猪“两头乌”毛色的形成机制打下理论基础。【方法】以剑白香猪为研究对象,通过酶解法测定不同毛色皮肤组织总黑色素提取率,利用碱溶法测定不同颜色毛发中不同种类黑色素的含量,以实时荧光定量PCR检测miR-2366和DCT、TYR和TYRP1基因在不同毛色皮肤组织中的表达情况;根据miR-2366与DCT基因的靶向关系,人工合成双荧光素酶报告载体(pmirGL0-DCT-3'-UTR-wt和pmirGL0-DCT-3'-UTR-mut)及miRNA-2366过表达载体mimic、抑制载体inhibitor和阴性对照NC,分别转染剑白香猪黑素细胞后,通过实时荧光定量PCR和Westernblotting检测DCT、TYR和TYRP1基因的相对表达量及其蛋白表达水平,并以碱溶法检测转染黑色素细胞中的总黑色素含量。【结果】在剑白香猪黑色皮肤组织中,总黑色素提取率极显著高于白色皮肤组织(P&lt;0.01,下同);在黑色毛发中,总黑色素、棕黑色素和真黑色素含量也极显著高于白色毛发;在黑色皮肤组织中,miR-2366的相对表达量极显著低于白色皮肤组织,而DCT、TYR和TYRP1基因的相对表达量极显著高于白色皮肤组织。在转染试验中,miR-2366mimic能极显著下调DCT、TYR和TYRP1基因表达,显著降低DCT、TYR和TYRP1蛋白表达(P&lt;0.05);导致黑色素细胞中黑色素含量极显著降低36.0%;而miR-2366 inhibitor极显著上调DCT、TYR和TYRP1基因及其蛋白的表达,促使黑色素细胞中黑色素含量极显著升高20.0%。【结论】miR-2366通过靶向负调控DCT基因表达而调节黑色素细胞中的黑色素含量,进而调控剑白香猪毛色的形成,提示miR-2366对黑色素的生成具有调控作用。

来源：2023年第12期

《南方农业学报》期刊编辑部

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