南方农业学报

作者：巨秀婷, 何金娣, 张梦洁, 张国莉, 史国民, 何涛,

关键词：郁金香, 内参基因, 实时荧光定量PCR, 筛选, 盐胁迫,

【目的】筛选郁金香在盐胁迫条件下稳定表达的内参基因，为开展郁金香耐盐相关基因表达调控相关研究提供理论参考。【方法】以郁金香栽培品种红色印象为材料，于苗期对其进行盐胁迫处理，不同时间（0、2、4、6、8、10、12、24和48 h）采集根、鳞茎和叶，通过实时荧光定量PCR检测候选内参基因在郁金香不同组织中的表达情况，再利用Delta CT计算每个样本的平均Ct值，再结合3个常用内参基因稳定性评估软件（geNorm、NormFinder、BestKeeper）的分析结果，利用RefFinder在线软件综合评价候选内参基因的表达稳定性，并通过目的基因质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因（SOS1）和液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因（NHX1）的表达分析验证内参基因的可靠性。【结果】在15个候选内参基因中筛选到9个可用于郁金香各组织实时荧光定量PCR的内参基因。候选内参基因的Ct值分析结果显示，25S rRNA在不同组织中的平均Ct值最低，表达丰度最高，Ct值分布范围相对集中，是根、鳞茎和叶均能稳定表达的内参基因。geNorm和NormFinder分析结果均显示，18S rRNA均能在根、鳞茎和叶中稳定表达，25S rRNA在根和叶中表现出较好的基因稳定性，NADP基因在鳞茎中基因稳定性较好。BestKeeper分析结果显示，根、鳞茎和叶组织中最佳的内参基因为25S rRNA，同时18S rRNA在根和叶中稳定性较好。结合上述4种分析结果通过RefFinder软件得到各候选基因在郁金香不同组织中的表达稳定性综合排名，其中根组织：25S rRNA>18S rRNA>TUB-6>EF1α>NADP>EF-1α>β-actin；鳞茎组织：NADP>25S rRNA>18S rRNA>EF-1α>EF1α>TUB-6；叶组织：25S rRNA>18S rRNA>EF-1α>CYP>UBC。【结论】9个候选内参基因在郁金香不同组织中的表达情况存在差异，25S rRNA和18S rRNA是在郁金香各组织的不同盐胁迫处理中稳定表达的内参基因，同时使用2个内参基因更有利于得到准确的基因表达定量结果。

来源：2023年第11期

《南方农业学报》期刊编辑部

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