南方农业学报

作者：张丹, 陈博雯, 杨博辉, 刘建斌, 卢曾奎,

关键词：湖羊, METTL14基因, m6A甲基化, 表达谱分析,

【目的】克隆湖羊甲基转移酶样蛋白14基因(METTL14)编码区(CDS)序列,探究其分子特征及组织表达分布规律,为揭示METTL14基因调控湖羊肌肉发育的特异性分子机制打下基础。【方法】提取湖羊肌肉组织RNA并反转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增METTL14基因CDS序列,通过ProtParam、ProtScale、SignaIP-6.0等在线软件进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR进行湖羊METTL14基因组织表达谱分析。【结果】湖羊METTL14基因CDS序列全长1371 bp,共编码456个氨基酸残基;湖羊METTL14基因CDS序列与黄牛、人类、小鼠、大鼠、猕猴、山羊、弯角剑羚、马、双峰驼、野牦牛、野猪和水牛等12个参考物种的METTL14基因核苷酸序列相似性为89.28%~99.78%,对应的METTL14氨基酸序列相似性为98.66%~100.00%;基于METTL14基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,湖羊与山羊的亲缘关系最近,与双峰驼的亲缘关系较远。湖羊METTL14蛋白分子式为C2277H3575N669O709S16,分子量为52179.45 Da,理论等电点(pI)为5.89,不存在信号肽,无跨膜结构域,具有较强的亲水性,属于不稳定蛋白,主要分布在细胞核(占69.6%);湖羊METTL14蛋白包含12个α-螺旋和10个β-折叠,但以无规则卷曲为主。METTL14基因在湖羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、睾丸、肌肉及皮下脂肪中均有表达,以心脏中的相对表达量最高,而肝脏中的相对表达量最低。【结论】METTL14作为m6A甲基化的核心蛋白,在物种进化过程中高度保守;METTL14基因在湖羊肌肉和脂肪等多个组织中均有表达,且表达量与机体的代谢活动相关,可作为调控湖羊肌肉生长发育的候选基因进一步研究。

来源：2023年第10期

《南方农业学报》期刊编辑部

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