南方农业学报

作者：莫红芳, 石宗承, 陆晶山, 何东贤, 杨延辉, 梁淑芳, 俸祥仁, 钱平, 韦巧燕,

关键词：猪塞内卡谷病毒, VP1蛋白, 原核表达, 多克隆抗体,

【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒（Seneca valley virus，SVV） VP1蛋白，制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性，为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化，构建质粒pUCK/VP1-opt，双酶切后连接至pET-28a （+）载体，构建原核表达质粒pET-28a-VP1。将重组质粒pET-28a-VP1转化大肠杆菌BL21（DE3）分子伴侣感受态细胞，经IPTG诱导表达获得重组VP1蛋白。采用Western blotting方法分析VP1蛋白的反应原性，并以包涵体变性和复性方式纯化。随后将VP1蛋白免疫新西兰白兔，分离血清获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。以间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定抗体的效价水平，以Protein A+G Agarose抗体纯化试剂盒纯化多克隆抗体。通过Western blotting和间接免疫荧光抗体试验（IFA）法验证多克隆抗体与SVV-CH-HB2016毒株反应的特异性。【结果】成功构建原核表达质粒pET-28a-VP1，在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导4 h条件下，重组VP1蛋白成功表达并主要以包涵体形式存在； Western blotting分析结果显示，重组VP1蛋白可与His-Tag Mouse mAb发生特异性结合，具有良好的反应原性；经变性和复性纯化的重组包涵体蛋白纯度和浓度均较高；采用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1∶32000；纯化后的抗体无明显杂带，纯度大于90.0%； Western blotting和IFA鉴定结果表明，多克隆抗体可特异性识别SVV-CH-HB2016毒株，重组VP1蛋白具有较好的免疫原性。【结论】通过原核表达SVV VP1蛋白获得的重组VP1蛋白具有较好的抗原性，制备的多克隆抗体特异性良好，可作为诊断试剂盒及亚单位疫苗研制的候选抗原。

来源：2023年第7期

《南方农业学报》期刊编辑部

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