南方农业学报

作者：马景霞, 王常伟, 吴洪才, 何吉鑫, 牛晓赛, 段志强, 朱杰,

关键词：传染性法氏囊病病毒 （IBDV）, 新型变异株, VP2蛋白, 亚单位疫苗, 免疫效果,

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株（vaIBDV） VP2蛋白原核表达质粒，并明确VP2蛋白的免疫原性，为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株（BZ）中扩增VP2基因片段，亚克隆至pET-28a （+）载体上构建重组原核表达质粒，并转化大肠杆菌BL21 （DE3）感受态细胞，以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定，并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定；经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后，制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡，通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达，获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达，大小约40 kD，且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应，其琼扩效价可达1∶32；经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后，融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好，安全性高，无免疫引起的不良反应，剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8，而血清抗体效价均在1∶20000以上，表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应，抗体阳性率达100%；使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况，结果显示免疫组鸡只均未发病，其法氏囊也无明显萎缩现象，即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达，且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好，能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果，为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。

来源：2023年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

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