南方农业学报

作者：邹芬, 何烈干, 李湘民, 黄瑞荣, 马辉刚,

关键词：辣椒, 三重PCR, 辣椒疫霉, 白绢病菌, 青枯病菌,

【目的】建立简便、快速、准确同时检测辣椒疫霉（Phytophthora capsici）、白绢病菌（Sclerotium rolfsii）和青枯病菌（Ralstonia solanacearum）的多重PCR检测体系，为辣椒多种土传病害同时早期诊断提供技术支撑。【方法】以3种辣椒土传病害病原菌辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌为研究对象，参考相关文献筛选出3种病原菌的3对特异性引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R，以引物浓度、退火温度、循环次数及延伸时间为变异因子，探索最佳反应体系，建立三重PCR检测方法，并基于田间实际发病样品对方法进行验证。【结果】优化的三重PCR反应体系25.0 μL： 3对引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R浓度分别为0.24、0.24和0.28 μmol/L，DNA模板各10 ng，2×Multiplex PCR Mix 12.5 μL，ddH2O补足至25.0 μL。最佳扩增程序： 94℃预变性1 min； 94℃ 30 s，55.8℃ 30 s，72℃ 45 s，进行35个循环； 72℃延伸10 min。建立的三重PCR体系可分别扩增出352、540和724 bp的特异性目的片段，体系灵敏度达10-1 ng/μL。利用建立的反应体系，对来自江西省不同市（县）的54份辣椒和土壤样品进行检测，样品检出率为100%。【结论】建立的三重PCR检测体系可对辣椒田间发病植株和土壤中辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌进行快速、准确检测，可应用于辣椒多种土传病害并发的早期预防和流行监测。

来源：2022年第12期

《南方农业学报》期刊编辑部

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