南方农业学报

作者：张美珍, 王志新, 吴羽媛, 梁海鹰,

关键词：马氏珠母贝, Toll样受体(TLRs), <i>TLRP</i>基因, 植核, 哈维氏弧菌, 脂多糖,

【目的】明确马氏珠母贝TLRP基因（PmTLRP）的组织表达特征及哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）刺激、植核及脂多糖（LPS）刺激后的时序表达特点，为进一步研究TLRs在马氏珠母贝中的免疫机制打下基础。【方法】采用RACE克隆PmTLRP基因cDNA序列，通过ProtParam、 ProtScale、 SignalP 4.0、 TMHMM v.2.0、 SMART、 SoftBerry Psite和SOPMA等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测PmTLRP基因在马氏珠母贝各组织中及经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后的表达情况。【结果】 PmTLRP基因cDNA序列全长2214 bp，包含33 bp的5'非编码区 （5'-UTR）、135 bp的3'非编码区（3'-UTR）及2043 bp的开放阅读框（ORF），共编码681个氨基酸残基；其编码蛋白含有信号肽、富含亮氨酸重复序列 （LRRs）、跨膜结构域和TIR结构域，符合TLRs家族所具有的特征； PmTLRP氨基酸序列与其他物种的TLRs氨基酸序列存在一定相似性，其中与美洲牡蛎TLP氨基酸序列的相似度较高。PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达，以在肝胰腺中的相对表达量最高，显著高于在其他组织中的相对表达量 （PPmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量于注射刺激后12 h开始上调，至注射刺激后16 h达最大值，约是注射刺激前 （0 h）的19.0倍。经植核刺激后， PmTLRP基因相对表达量在植核后5~20 d呈逐渐上升趋势，于植核后30 d达最大值，约是植核前 （0 h）的6.4倍。在LPS刺激下， PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量先上升后下降，至注射刺激后3 h达最大值，约是对照组的5.0倍； PmTLRP基因在肝胰腺中的相对表达量呈升高→降低→升高→降低→升高的波动变化趋势，至注射刺激后24 h相对表达量上调到最大值，约是对照组的6.0倍。【结论】 PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达，但表达水平存在差异，经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后呈明显上调表达趋势，说明TLRP在马氏珠母贝的免疫防御反应中扮演重要角色。

来源：2022年第8期

《南方农业学报》期刊编辑部

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