南方农业学报

作者：卢金昭, 房晓宸, 梁海鹰, 何军军, 申铖皓,

关键词：马氏珠母贝, <i>NatF</i>基因, 性腺, 卵, PAMPs刺激, 表达特征,

【目的】掌握马氏珠母贝（Pinctada fucata martensii）Nα-乙酰转移酶60基因（PmNatF）在不同组织、不同发育时期及不同病原相关分子模式（PAMPs）刺激下的表达变化规律，为后续研究NatF基因功能及揭示其在刺激应答中的分子机制提供理论依据。【方法】运用RACE克隆PmNatF基因cDNA序列，通过ProtScale、ProtParam、PSITE-Search、SignalP 4.1、SMART及Cell-PLoc 2.0 Package等在线软件进行生物信息学分析，并以实时荧光定量PCR检测PmNatF基因组织表达分布特征及其在不同发育时期和PAMPs刺激后的表达情况。【结果】PmNatF基因cDNA序列全长1142bp，其开放阅读框（ORF）为693 bp，5'端非编码区（5'-UTR）为181 bp，3'端非编码区（3'-UTR）为268 bp，共编码230个氨基酸残基。PmNatF蛋白分子量约26.64 kD，理论等电点（pI）为8.54，总平均亲水性系数为-0.068，为不稳定的亲水蛋白；PmNatF蛋白不存在信号肽和跨膜结构域，包含有N-乙酰转移酶结构域（Acetyltransf_1 domain），其亚细胞定位于细胞质。PmNatF蛋白二级结构中，α-螺旋占36.52%，β-转角占6.96%，延伸链占22.91%，无规则卷曲占33.91%；其三维结构与太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）的NatF蛋白结构相似。PmNatF氨基酸序列与其他物种的NatF氨基酸序列高度同源，其中与美洲牡蛎（C.virginica）和欧洲大扇贝（Pecten maximus）的NatF氨基酸序列相似性较高，分别为76.52%和75.22%。PmNatF基因在马氏珠母贝各组织中均有表达，以在性腺中的相对表达量最高；在不同发育时期也均有PmNatF基因表达，其相对表达量以卵的最高，担轮幼虫的最低。在脂多糖（LPS）刺激下，马氏珠母贝鳃组织PmNatF基因表达呈上调趋势，于刺激24 h时达最高值；在肽聚糖（PGN）刺激下，至刺激6 h时出现明显的峰值；在聚肌胞苷酸（PolyI：C）刺激下，则在刺激72 h时出现峰值。【结论】PmNatF基因具有较高的保守性，在马氏珠母贝各组织及不同发育时期均有表达，尤其以性腺和卵的相对表达量最高，且经PAMPs刺激后在马氏珠母贝鳃组织中呈明显的差异表达，表明PmNatF基因可能参与马氏珠母贝生殖细胞的分裂和成熟及其免疫应答过程。

来源：2021年第11期

《南方农业学报》期刊编辑部

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