南方农业学报

作者：陈东荣, 黄星晨, 张俊俊, 杨维菡, 张明, 付强,

关键词：水牛, <i>Tle6</i>基因, 卵母细胞, 胚胎, 多克隆抗体, 母源效应基因,

【目的】明确水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式，并通过构建原核表达载体诱导表达融合蛋白及免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体，为进一步揭示Tle6基因在水牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR扩增水牛Tle6基因编码区（CDS）序列，经生物信息学分析后，分别以半定量PCR和实时荧光定量PCR检测分析水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式。构建重组原核表达载体，以IPTG诱导表达的融合蛋白免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体，再利用TLE6多克隆抗体检验TLE6蛋白在水牛不同组织及卵母细胞和早期胚胎中的表达情况。【结果】水牛Tle6基因CDS序列全长1731 bp，编码576个氨基酸残基，其编码蛋白分子量为64.09 kD，理论等电点（pI）为5.69，属于亲水性蛋白。Tle6基因仅在水牛的卵母细胞中特异性表达。重组原核表达载体p ET-32a-Tle6转化BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导6 h，融合蛋白TLE6的表达量最高，且以可溶性蛋白和包涵体2种形式进行表达；以纯化的融合蛋白TLE6免疫小鼠成功制备获得TLE6多克隆抗体，其抗体效价为1∶64000，能与融合蛋白TLE6及水牛卵母细胞发生特异性反应，即具有很强的特异性。【结论】Tle6基因仅在水牛卵母细胞中特异性表达，而在其他组织中未见表达。不同于其他MEGs的表达模式，Tle6基因在水牛卵母细胞及胚胎早期发育过程中呈特异性持续表达，可能在水牛卵母细胞成熟及附植前的胚胎发育过程中发挥重要作用。

来源：2021年第6期

《南方农业学报》期刊编辑部

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