南方农业学报

作者：任春芝, 谢映红, 王秋华, 韦英益, 胡庭俊,

关键词：猪伪狂犬病毒（PRV）, RAW264.7细胞, 体外诱导, 炎症反应, 炎症因子, 环氧合酶,

【目的】探讨猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）炎症反应的影响，确定PRV的最佳感染剂量和感染时间，为建立RAW264.7细胞体外病毒感染炎症反应模型打下基础。【方法】PRV按10倍递增稀释成10-5~10-1 PRV稀释液，感染RAW264.7细胞并孵育1.5 h，弃病毒液后加入含5%胎牛血清的DMEM维持培养液继续培养，分别于继续培养2、4、8、12、24和48 h时收集细胞上清液，采用ELISA测定IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1和IFN-γ分泌水平及环氧合酶（COX-1和COX-2）活性，并以CCK-8法测定细胞活性。【结果】以PRV感染RAW264.7细胞4~48 h后均能通过PCR扩增获得PRV核酸的特异性条带，故选择4~48 h作为后续研究的PRV感染时间范围；10-2 PRV~10-1 PRV感染可显著降低RAW264.7细胞活性（P-3 PRV组仅在培养48 h时出现下降趋势，而10-5 PRV~10-4 PRV感染对RAW264.7细胞活性无显著影响。PRV感染RAW264.7细胞后，其胞内炎症因子IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌水平整体上呈升高趋势，其中10-3 PRV感染RAW264.7细胞12 h能显著或极显著（P-4 PRV~10-1 PRV感染组的IL-10分泌水平均呈升高趋势，而10-5 PRV感染组在感染8和24 h时IL-10分泌水平明显低于空白对照组，至感染48 h所有病毒感染组的IL-10分泌水平均降低；10-3 PRV~10-1 PRV感染8~24 h能有效提高RAW264.7细胞的COX-2活性，但对COX-1活性的影响不明显。【结论】PRV感染能诱导RAW264.7细胞发生炎症反应，其中10-3 PRV体外感染RAW264.7细胞8~12 h是建立RAW264.7细胞炎症反应模型的最佳条件。该模型可应用于PRV感染与RAW264.7细胞炎症反应相关干预药物的研究，为进一步揭示PRV感染机理及开发抗病毒感染药物提供理论依据。

来源：2021年第5期

《南方农业学报》期刊编辑部

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